2,5-己二酮诱导大鼠神经组织细胞凋亡及其分子机制研究

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1、中图分类号密级2.5一己二酮诱导大鼠神经组织细胞凋亡及其分子机制研究Studyon2,5-·Hexanedione--InducedCellApoptosisinNerveTissueofRatsandItsMolecularMechanism计:学位论文:40页表格:6个插图:8幅指导教师:朴丰源教授申请学位级别:硕士学位培养单位:大连医科大学董伟学科(专业):劳动卫生与环境卫生学完成时间:二O一四年五月答辩委员会主席:独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地

2、方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得大连医科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期:——年——月——日关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属

3、于(请在以下相应方框内打“√”):1.保密口,在年解密后适用本授权书。2.不保密口。作者签名:导师签名:日期:年月日日期:年月日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.5一(一)刚i舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.71.试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..72.

4、仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..73.动物处理.:⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..84.体重测量与神经行为观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..85.大鼠尾神经电生理测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.86.RealtimeRT—PCR检测基因表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.97.Western—Blotting检测蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l18.TUNEL-Hoechst双染色检测神经细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..13‘9.统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..14(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141.

5、HD染毒对大鼠体重的影响·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..142.HD染毒对大鼠神经行为学指标的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.153.HD对大鼠尾神经神经电生理的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164.TUNEL-Hoechst双染色观察大鼠脊髓组织细胞凋亡发生⋯⋯⋯⋯.175.HD对大鼠脊髓和坐骨神经NGF的mRNA表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯..186.HD对大鼠脊髓和坐骨神经NGF的蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯197.HD对大鼠脊髓和坐骨神经Akt和p-Akt蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯208.HD对大鼠脊髓和坐骨神经Bad和p-Bad蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯20(四)讨论⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..26三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..31(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..35四、硕士期间发表论文情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.39五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.40大连医科大学硕士论文2,5一己二酮诱导大鼠神经组织细胞凋亡及其分子机制研究硕士生姓名:董伟指导教师:朴丰源教授专业名称:劳动卫生与

7、环境卫生学摘要目的:观察正己烷的终毒物2,5.己二酮(皿)暴露大鼠神经组织细胞凋亡发生频率,探讨神经生长因子(NGF)介导P13K/AKT信号通路在HD诱导大鼠神经组织细胞凋亡的作用。材料和方法:40只雄性SD大鼠购于大连医科大学试验动物中心,称重并按随机数表法分为4组。将liD溶于O.9%无菌生理盐水,用腹腔注射方法对大鼠进行染毒。试验组的染毒剂量分别为100m眺g、200mgacg和400mg/kg,注射量为0.3ml/100g;对照组以相同剂量生理盐水腹腔注射。染毒时间为5周,每周5次。试验期间,每周末对各组大鼠步态进行神经行为学评价;用肌

8、电图与诱发电位仪检测各组大鼠尾神经远端潜伏期(DL)和神经传导速度(MCV)。TL烈ELHoecbSt双染色法,观察各组大鼠脊髓神经细胞

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