蛋白A亲和层析介质征求意见稿编制说明.doc

《蛋白A亲和层析介质征求意见稿编制说明.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、蛋白A亲和层析介质（征求意见稿）编制说明《蛋白A亲和层析介质》国家标准起草工作小组二〇一九年一月21《蛋白A亲和层析介质》国家标准编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会专项《国家质量基础的共性技术研究与应用》项目《生物产业共性技术标准研究》中课题《海洋生物产品质量控制与检测技术标准研究》，项目编号“2016YFF0202304”。本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2019年完成。本标准起草工作组由中国科学院过程工程研究所等单位共同组成。二、目的和意义单抗药物对生产制造纯化工艺的效能和成本要求非常高，单抗分离纯化成本占其

2、生产总成本的50-70%，其中蛋白A亲和层析介质是其生产的关键原材料之一，其性质和成本将决定单抗产品的最终生产成本、纯度和收率。目前，80%以上的抗体纯化使用蛋白A亲和层析。蛋白A亲和层析介质的载量、稳定性等是单抗纯化选择介质时的首要考虑。蛋白A来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体分子Fc段特异性结合的结构域。将蛋白A偶联至基质上（以琼脂糖基质为主）制成蛋白A亲和层析介质，可以与抗体特异性结合，选择性极高，一步亲和层析可达到95%以上的纯度。蛋白A亲和层析因特异性强、操作简单、处理量大等优势，已成为抗体药物研发和生产阶段的核心纯化步骤。蛋白A亲和层析

3、介质作为单抗药物生产过程的关键分离材料之一，其性质和成本决定单抗产品的最终纯度、收率和生产成本。我国当前尚未建立相应的国家及行业标准，国内市场上的蛋白A亲和层析介质产品质量良莠不齐，缺乏产品生产、检验和质量规范。这在一定程度上限制了我国蛋白A亲和层析介质的发展及相关层析技术的应用，更阻碍了国内单抗产业的发展水平。因此建立蛋白A亲和层析分离介质的国家标准，对于规范蛋白A亲和介质行业，推进层析技术应用，以及促进单抗产业发展，均具有重要的理论和现实意义。21目前，蛋白A亲和层析介质的性能参数测定方法多种多样，以动态载量测定方法为例，一种是将介质装柱并连在层析仪上，平衡，上

4、样抗体，待流出液浓度与上样浓度相等时上样结束，依次经淋洗、洗脱，收集洗脱液，测定洗脱液体积及洗脱液浓度，计算洗脱载量。另一种则是将介质装柱并连接到层析仪上，平衡、上样抗体，根据穿透曲线，以5%穿透处介质对抗体的吸附量进行载量计算。还有则是在第二种方法的基础上按照10%穿透处介质对抗体的吸附量进行载量计算。这三种方法测定同一介质样品得到的结果均有明显差异。由于测定方法不同产生的类似问题也出现在其他参数测定上。这些差异对于介质的应用存在诸多不便。因此，建立蛋白A亲和层析介质国家标准，能够规范蛋白A层析介质的生产与检验过程，促进介质和相关层析技术在单抗生产等领域的应用，并

5、对推动我国层析介质在世界范围内的应用均具有重要意义。三、标准制定原则（一）标准编制原则蛋白A亲和层析介质属于生物体系分离材料，重点围绕介质的主要性能要求，设定相应技术内容。在确保产品质量的基础上，充分体现产品的特点。（二）标准制订主要依据1、标准编写遵循GB1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的有关要求。2、标准编写内容参考我国与化学品相关的法规、标准，包括GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备、GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备等等。四、标准主要技术内容（一）标准适用范围的说明本标准规定了蛋白A亲和层析介质的质量要求

6、、检测方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存的标准。本标准适用于骨架为琼脂糖微球的分离介质的生产与检测。（二）内容提要蛋白A亲和层析介质的主要理化性质包括外观、粒径及分布、耐受压力强度测试、配基密度、动态载量、微生物污染等。2.1外观2.1.1方法提要采用光学显微镜观测蛋白A亲和层析介质的外观形貌。光学显微镜使用普及率高，可观测范围一般在数微米到数百微米之间，样品处理过程和观测过程都简便易行，观测结果21清晰、重复性好，是常用的材料外观表征方法之一[1]。蛋白A亲和层析介质的外观形貌主要包括球形和透明性，其尺寸大小在光学显微镜的测量范围内[2]。2.1.2试剂和材料

7、实验用水应符合GB/T6682-1992中三级要求。光学显微镜。砂芯漏斗为G3（4.5-9μm）。真空泵极限真空0.10MPa。2.1.3样品前处理用量筒量取5mL蛋白A亲和层析介质，置于50mL砂芯漏斗中。用三级水清洗5次，每次2min，抽干5min。将洗净的蛋白A亲和层析介质置于烧杯中，介质上应有2cm的三级水。混匀后得到蛋白A亲和层析介质与水的混合体系。2.1.4样品观测用塑料吸管吸取1mL蛋白A亲和层析介质与水的混合体系置于载玻片上，调整显微镜放大倍数。以视野里80%以上面积均为介质为标准，用塑料吸管增减载玻片上的微球，最后用盖玻片压上。调节光学显微镜焦