3种海藻中岩藻聚糖的提取分离、结构表征及其对纤溶系统影响的研究

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1、中国海洋大学硕士学位论文3种海藻中岩藻聚糖的提取分离、结构表征及其对纤溶系统影响的研究姓名：台文静申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：于广利2012063种海藻中岩藻聚糖的提取分离、结构表征及其对纤溶系统影响的研究摘要本文以海蕴(Nemacystusdecipiens)、江蓠(Gracilariaasiatica)以及石花菜(Gelidiumamansii)为原料，采用脱脂后水提取和碱提取的方法，对这3种海藻中的多糖进行了提取分离，共得到12种粗多糖组分。利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和高

2、效液相色谱(HPLC)分别对其分子量和单糖组成进行了分析，结果表明，3种海藻中均有含量不等的岩藻糖，其中，海蕴多糖的岩藻糖含量最高，其热水提取多糖NW2只由岩藻糖和葡萄糖醛酸组成，摩尔比约为7：2。而江蓠和石花菜则以半乳糖为主且含有少量的葡萄糖和岩藻糖，其中，江蓠的冷水提取多糖GVC的岩藻糖含量最高(18％)。根据硫酸基含量测定结果，海蕴多糖的硫酸化程度普遍较高，其中又以NW2的硫酸基含量最高(20．3％)，而4种江蓠多糖的硫酸基含量均不超过10％，石花菜多糖则以中性糖为主。另外，由分子量测定结果可

3、以看出，各粗多糖的纯度较低，需要进一步的纯化。本文通用离子交换色谱，对粗多糖NW2和GVC进行了纯化，得到了组分NPl．4和GPl—3共7种纯品多糖，其中得率最高的分别为NP2和GP2，其分子量为487kD和1173kD，硫酸基含量为19．4％和5．77％，岩藻糖含量为77％和20％。通过以上分析，结合傅里叶变换红外光谱(FTIR)、核磁共振波谱(NMR)和甲基化分析结果表明，NP2为一种岩藻糖硫酸酯，岩藻糖以仪1，3连接为主链(约80％)，2位上有葡萄糖醛酸支链(约20％)，且通过仅l，2与主链连

4、接。为了确定其细微结构，将NP2采用温和稀酸降解获得其寡糖混合物，经BioGel—P4柱分离获得8个寡糖组分，再通过电喷雾碰撞诱导串联质谱法(ESI—CID—MS／MS)对这8种硫酸岩藻寡糖进行了序列分析，确定其结构序列分别是：Fucp4S3Acod--*3Fucp，Fucp4So【．1--',3Fucp4S，Fucpod---*3(GlcUApotl---}2)Fucp，Fucp4S3AcotI--*3Fucpotl--*3Fucp，FucpSotl---',3(GIcUApotl--,'2)Fu

5、cp4Acotl---}3Fucp，G1uUAp伐1_3Fu印0【14-．3(GlcUApctl4--}2)Fucpotl---',3Fucp，FucpSAcal_3Fu印仪l一3(GIcUApetl--》2)Fucpotl---}3(GIcUApctl---÷2)Fucpctl---}3Fucp和FucpSctl3FucpAcotl_3Fucpcxl4---．3(GlcUApotl---}2)Fu印仅l_3Fu印S仅1_3(GlcUAp仅l_2)Fucpotl---}3FucpS，硫酸基位于岩藻糖

6、C2位和C4位羟基，乙酰基多位于岩藻糖的非还原端。寡糖结构分析进一步证明NP2是以Ot1，3连接的岩藻糖为主链，葡萄糖醛酸通过CL1，2与主链连接。这些结构特殊的寡糖丰富了海洋寡糖库数据，并为进一步的糖牛物芯片研究，探讨其与蛋白的相互作用提供了基础。在结构研究的基础上，以APTT、TT、PT为评价指标，评价了纯化多糖NPl—4和GPl—3的抗凝血活性，并通过测定UPA、T-PA、PAl．1的值，探讨了其对纤溶系统的影响，结果表明，多糖NP2、NP4和GP2有一定的抗凝血活性，而这些多糖均可提高t-P

7、A／PAI一1，即促进纤溶酶原转化为纤溶酶，从而促进血栓的溶解，其中以NP2的效果最为显著，t-PA／PAI．1值约为空白的2．7倍，远高于肝素对照品。最后，将本文所得的各纯化多糖和寡糖组分，通过多糖的荧光标记和合成寡糖的拟糖脂，制备成糖生物学芯片，为寡糖药物的开发提供了理论。关键词：岩藻聚糖硫酸酯：硫酸岩藻寡糖；电喷雾串联质谱；纤溶活性；糖生物学芯片Extraction，isolation，structuralcharacterizationandeffectonthefibrinolyticsy

8、stemoffucoidansfrom3kindsofAlgaeAbstractInthispaper，3kindsofalgae(Nemacystusdecipiens，GracilariaasiaticaandGelidiumamansii)wereusedasstartingmaterials．Thealgaewereextractedwithwaterandalkalinesolutionafterdelipided，thus，12typesofcrudepo