一株嗜盐杆菌的溶藻特性及其溶藻活性物质的分离纯化

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1、学校代码：10264研究生学号：M120150350上海海洋大学硕士学位论文题目：一株嗜盐杆菌的溶藻特性及其溶藻活性物质的分离纯化英文题目：Analgicidalbacteriuminvolvedinitsalgicidalcharacteristicsandthecharacterizationofthealgicidalsubstance专业：渔业研究方向：环境微生物姓名：黄珺指导老师：黄洪辉研究员二零一五年六月一日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的

2、成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属

3、于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年上海海洋大学硕士学位论文一株嗜盐杆菌的溶藻特性及其溶藻活性物质的分离纯化摘要赤潮是全球性的海洋生态灾害问题之一，而其防治研究一直广受关注。海洋溶藻细菌对赤潮藻类有高效的抑制作用，对环境负面影响较小，已成为赤潮防治研究的热点之一，尤其是溶藻活性物质的发现，为赤潮治理提供了新的方法和思路，也是目前研究的难点和要突破的重点。对中肋骨条藻（Skeletonemacostatum）具有间接溶藻作用的嗜盐杆菌溶藻菌株（Halobacillussp.HSQAY1，GenBank登录号为JX308828）由本实

4、验室从深圳大鹏湾赤潮爆发海域分离并保藏。本文研究了该嗜盐杆菌的生长特征，胞外溶藻物质的理化特性，并对溶藻物质进行了初步的分离纯化。主要结果如下：（1）采用平板菌落法测定了溶藻细菌HSQAY1的生长曲线，结果显示0-8h为迟缓期，8-40h为对数期，40-72h进入稳定期，72h后进入衰亡期；迟缓期期间细菌无菌滤液的溶藻作用不显著，而进入对数期后其溶藻作用显著增强，此后溶藻率基本稳定在80.4%~93.4%之间。（2）细菌分别用pH为5.5，6.5，7.5，8.5和9.5的培养基培养48h后，其无菌滤液的溶藻率分别为20.62%，46.10%，61.14%，

5、62.99%，74.41%，表明弱酸性条件不利于细菌生长或合成分泌溶藻物质，而碱性环境更有利于细菌的生长或溶藻物质的合成分泌；用盐度分别为20，25，30，35，40培养基培养细菌48h，其无菌滤液的溶藻率分别为53.03%，88.13%，87.94%，41.91%和17.25%，表明盐度为25~30时最有利于细菌生长或合成分泌溶藻物质，而盐度过高（盐度为40）则会抑制其生长或溶藻物质的合成。（3）菌株HSQAY1产生的溶藻活性物质在强酸性条件下（pH=3）丧失活性，而pH5~11时其溶藻率在83.4%~98.4%之间；温度在30~110℃时，其溶藻率在7

6、1.7%~94.5%之间，表现出一定的酸碱稳定性和热稳定性；此外，该溶藻物质不受反复冻融（-20℃）的影响。说明溶藻活性物质不耐强酸，但有较好的耐碱性、热稳定性和不受反复冻融影响，有较强的环境稳定性。（4）无菌滤液经乙醇沉淀分离获得的沉淀相具有溶藻活性，溶藻率高达到65.6%，而浸提相无溶藻活性；硫酸铵饱和度为60%~80%时可析出具有显著溶藻活性的粗蛋白沉淀，超滤法获得溶藻活性组分的分子量大于10kDa，表明该溶藻I上海海洋大学硕士学位论文活性物质可能是一种分子量大于10kDa的蛋白类物质。（5）硫酸铵沉淀的粗蛋白SDS-PAGE电泳结果显示在15~40

7、kDa间有3条明显的特异蛋白条带，高效液相色谱（SEC柱）分析结果显示出3个峰，其中可能包含有溶藻活性物质组分。关键词：嗜盐杆菌菌株HSQAY1，中肋骨条藻，溶藻物质，环境稳定性II上海海洋大学硕士学位论文AnalgicidalbacteriuminvolvedinitsalgicidalcharacteristicsandthecharacterizationofthealgicidalsubstanceAbstractRedTideisoneoftheseriousecologicalmarinedisasters.Itspreventionandco

8、ntrolresearchhasbeenwideconcern.N