西洋参皂苷对缺氧性大脑皮层神经元坏死及凋亡的影响

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1、南昌大学硕士学位论文西洋参皂苷对缺氧性大脑皮层神经元坏死及凋亡的影响姓名：漆琼瑶申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：高幼奇20120528摘要摘要目的：观察西洋参皂苷对缺氧．复氧诱导后胎鼠大脑皮层神经元坏死和凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法：1、离体培养胎鼠大脑皮层神经元6d，免疫细胞化学染色法检测NSE及GFAP表达率；2、MTT法检测不同浓度组西洋参皂苷对神经元活力的影响；3、神经元离体有氧培养4d，经缺氧12h复氧48h培养建立缺氧．复氧损伤凋亡模型；4、Trypallblue拒染法检测不同缺氧时间(6h，12h，24h)对神经元存活

2、率影响；5、实验分组：正常对照组：正常有氧培养；阳性对照(凋亡诱导)组：正常培养4d后行缺氧12h复氧48h培养；药物组：正常培养4d后分别加入终浓度为O．025、0．05、0．1、O．2m∥ml西洋参皂苷预处理4h，余同阳性对照组；6、MTT法检测各实验组神经元活力：7、AIⅡ1exinV-FITC／PI双染法，流式细胞仪定量分析各实验组凋亡率及坏死率；8、免疫细胞化学染色法检测各实验组抗凋亡蛋白Bcl．2及凋亡蛋白Bax和Caspase．3表达率；9、DNA琼脂糖凝胶电泳法检测各实验组DNA梯度凋亡条带；10、Hoechst33342荧光染色法

3、检测各实验组凋亡率。结果：1、体外培养胎鼠大脑皮层神经元6d，NSE表达率为(92．8士0．35)％，GFAP表达率为(5．9土0．32)％；2、MTT法检测结果示：0．025．O．2m∥ml西洋参皂苷可提高神经元活力，与正常对照组(O．450士O．027)比较，0．05mg／ml(0．494土O．011)、0．1m∥ml(O．535士0．022)组有明显增殖作用(P<0．01)，而O．4m∥ml(O．243土O．022)、O．8mg／m1(0．082士0．007)组则表现出明显药物毒性作用(P<0．01)；3、研panblue拒染法结果示：缺氧6

4、h、12h、24h，复氧48h神经元存活率分摘要别为(87．87士3．04)％、(66．80士3．82)％、(28．03士4．45)％。除6h组外，12h及24h组细胞存活率均较正常对照组(92．40土3．24)％明显降低(P

5、ml(0．446士O．050)组神经元活力均较阳性对照组明显增加(P

6、P

7、58．46士O．71)％，均较阳性对照组明显升高俨<0．01)；7、凋亡蛋白Bax免疫细胞化学染色结果示：阳性对照组(72．19土3．97)％Bax蛋白表达较正常对照组(60．33士2．06)％明显升高(P<0．01)。0．05、0．1、0．2mg／ml西洋参皂苷组BaX蛋白表达分别为(62．94士1．68)％、(57．97土2．6))％、(60．27士1．26)％，均较阳性对照组明显降低(P

8、．44)％明显升高(P<0．01)。O．05、O．1、O．2mg／ml西洋参皂苷组Caspase．3蛋白表达分别为(56．