荷载dbait的纳米粒的构建及其对人脑胶质瘤的放射敏感性影响的实验性研究

荷载dbait的纳米粒的构建及其对人脑胶质瘤的放射敏感性影响的实验性研究

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时间:2019-02-22

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1、徐州医学院硕士学位论文荷载Dbait的纳米粒的构建及其对人脑胶质瘤的放射敏感性影响的实验性研究姓名:颜红莲申请学位级别:硕士专业:肿瘤学指导教师:章龙珍2012-04徐州医学院硕士学位论文荷载Dbait的纳米粒的构建与其对人脑胶质瘤的放射增敏性的实验研究中文摘要目的构建荷载Dbait的荧光纳米粒,观察其对人脑胶质瘤U87细胞辐射敏感性的影响,并初步探讨其可能作用机制。方法首先采用EDC和NHS缩合法合成RBITC.PAMAM,根据ImITC物质在紫外分光光度计下特有的吸收峰值鉴定I国ITC.PAMAM是否合成成功;琼脂糖凝胶电泳法鉴定不同N/P比值对ImITC.PAMAM/Dbait包封

2、率的影响,寻求最佳N/P比值,合成包封稳定的RBrrC.PAMAM/Dbait纳米粒;阴离子置换法和DnaSd酶法检测该纳米粒的稳定性;I沿ITC.PAMAM/Dbait纳米粒转染U87细胞;实验分4组:A组(空白对照组:未转染+OGy)、B组(单纯转染组:转染+0Gy)、C组(单纯照射组:未转染组“Gy)、D组(转染+4Gy)。各组经不同干预因素处理后24h、48h,流式细胞仪检测细胞周期分布情况及细胞凋亡;MTT检测各干预因素处理后24h细胞增殖活性,免疫细胞染色检测10Gy照射后24h的1,.H2AX蛋白表达情况。结果1.通过紫外分光光度计及琼脂糖凝胶电泳鉴定荧光PAMAM合成成功

3、和在N/P达到8:1时荧光黝。MAM包封Dbait稳定;2.荧光显微镜下观察转染效率高达90%。3.(1)流式细胞仪检测各组细胞周期分别情况显示:C组、D组细胞处理后24h出现G2/M期阻滞分别为(33.06±2.60、32.71±2.13)%,与A组、B组相比(23.61±2.34、23.28±2.44)%,差异有统计学意义∽羽.DJ),D组与C组相比无统计学意义(尸>D.酊),48h各组细胞周期分布基本相同,C和D组的G2/M期结果分别为:(25.91±2.50)%和(25.82±2.99)%,C与D组相比,无统计意义(P徐州医学院硕士学位论文>D.∞);24小时A组、B组、D组的凋

4、亡率分别为(2.20士O.13)%、(2.43±0.13)%和(3.97±O.24)%,D组与A组、B组相比有统计意义,C组与D组无统计学意义,随着时间的延长,C组和D组的凋亡率((4.99±0.25)%、(4.95±O.18)%)有所增加,但无统计学意义(p>0.05)。(2)MTT法检测各组细胞增殖活性显示:C组、D组细胞增殖率分别为69.32%,66.35%,两组之间差异无统计学意义(P>D.叮),但两组与A组(100%)及B组(93.54%)相比差异均有统计学意义(尸

5、表达(++),而D组呈强阳性表达(+++)。结论1.成功地构建了荷载Dbait的荧光纳米粒(I①rrC.PAMAM.Dbait);2.该纳米粒对U87细胞呈现很高的转染效率;3.Dbait可能对U87细胞具有辐射增敏效应。关键词Dbait;聚酰胺.胺;胶质瘤;放射治疗;放射敏感性;细胞周期阻滞徐州医学院硕士学位论文COnstructionofnanopaniclesofDbaitandexperimentaIstlldVofradiosensitizationofhumangliomasU87ceUsStlldVOtradl0SenSlnZanOn0InUmangllomaSU芍,CeU

6、SAbstractobjec嘶eToCoIls觚Ctionofnuorescellt加nopmiclesofDbait,observeditse腩CtsonhllIIlan哲iomaU87cellssensitivitytoradiation,aIldtoeXploreitspossiblemecl坷【lismofaction.MetlIodsFirst,wesynⅡlesizedI圆rrC—PAMAMbyEDCandNHS;0IbsenredwhefllerI沿ITC一Ⅳ山队MwaSsylltllesizedsucCess矗111yaccordillgtouniqueabso印tion

7、peakofRBIrrCi11ul仃avioletspectophotometer;Ider血6cationofdi珏器伽N/PratioofRBITC—PAMAM/Dbaitencapsulationrateinfluenceusingagarosegelelec仃ophoresis,se呔edthebeStr撕oofN皿the铋仃印mentofstablenallop枷desofI迅ITC-PAMAM,Dbaitwassynme

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