mir-223调节atm基因表达影响人脑胶质瘤u87mg细胞放射敏感性的研究

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1、乂n.人学硕.I:研究少毕、丨k论文miR-223调节ATM基因表达影响人脑胶质瘤U87MG细胞放射敏感性的研究院系：复旦大学附属肿瘤医院专业：肿瘤学硕士生姓名：梁丽萍学号：09211230026导师：章真教授导师组成员：吴兴中教授马学军副教授朱骥副教授俞晓立副教授kil人学硕I.?研宂1:.毕、丨卩.论文目录中文摘要1英文摘要3刖55r-第一部分miR-223对ATM调控关系的研宂tut"10材料和方法1118職2224第二部分miR-223对人脑胶质瘤U87MG细胞放射敏感性的研究HUs25材料和

2、方法25会吉m3740会吉ife42全文总结43参考文献44纖4857复U人学硕I:研究卞毕、Ik论文miR-223调节ATM基因表达对人脑胶质瘤U87MG细胞放射敏感性影响的研宄中文摘要背景和目的:microRNA-223(miR-223)可以促进粒细胞的分化和成熟，可抑制Stathminl的表达对肝癌发生起负性调控作用，miR-223也可以通过调控抑癌基因EPB41L3的表达促进胃癌的转移和侵袭。为进一步探讨miR-223的功能，本实验室通过生物信息学预测发现许多miR-223的潜在靶基因，猜测m

3、iR-223可能通过调控这些基因的表达而影响肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭转移等，并在前期研宄中证实miR223确实下调IGF-1R的表达进而抑制细胞的增殖，但是miR-223对肿瘤细胞辐射敏感性的作用还不清楚。ATM作为DNA双链断裂后促进DNA同源重组修复的重要调控因子，在DNA损伤修复中发挥重要作用。本研究的目的是探讨miR-223对ATM的调控作用及miR-223对肿瘤细胞放射敏感性的影响，为改善肿瘤细胞的放射治疗效果提供新思路。材料和方法:PCR扩增包含miR-223结合位点的ATM3’UTR片

4、段，将其克隆到psi-CHECK载体中，构建psi-CHECK_ATM3’UTR质粒；PCR扩增tniR-223片段，将其克隆到慢病毒载体PLL3.7中，将psi-aiECK-ATM3’UTR质粒与PLL3.7-miR-223质粒共转染到293T细胞，利用双荧光素酶报告基因方法验证miR-223对ATM的调控作用；包装PLL3.7_miR_223慢病毒，感染人脑胶质瘤U87-MG细胞，建立高表达miR-223的稳定细胞株；Real-timePCR检测miR-223、ATM的表达水平，WesternBl

5、otting检测ATM蛋白的表达，给予细胞0、1、2、4、6、8GyX线射线照射后，克隆形成实验检测细胞的放射敏感性，LQ模型拟合细胞存活曲线。结果:双荧光素酶报告基因检测显示共转染miR-223和psi-CHECK-ATM3’-UTR后荧光活性下降明显，差别具有统计学意义（p=0.01),并且miR-223的抑制剂可以逆转荧光活性的下降，miR-223可以与ATM3’UTR结合调控ATM。RT-PCR和real-timePCR证实miR-223在U87-MG中过表达成功；Real-timePCR检测

6、miR~223过表达后ATMmRNA表达没有明显变化，而WesternBlotting结果显示ATM蛋白水平明显降低。克隆形成实验检测U87-223和U87-EV细胞的放射敏感性，经LQ模型拟合后得出U87-223细胞存活曲线位于U87-EV细胞下方，1feu人学硕I:研究卞毕业论文SF2(U87-223)=0.483

7、7.46/5.43=1.373，过表达miR-223可以增强人脑胶质瘤U87MG细胞的放射敏感性。结论:miR-223可以在翻译水平抑制ATM的表达，过表达miR-223可以提高U87MG细胞的放射敏感性，miR-223作为基因调控因子可以为肿瘤细胞辐射增敏提供新靶点。【关键词】ATMmiR-223放射敏感性U87-MG【中图分类号】R730.552复u人学硕丨研究十.毕、

8、k论文MiR-223modulatesradiosensitivityofU87-MGcellsthroughtargeting

9、ATMABSTRACTPurpose:miR-223canpromotethedifferentiationandmaturationofgranulocyteprecursors,andsuppressthehepatocellularcarcinomacellthroughtargetingStathminl,italsoinhibitstheexpressionoftheanti-oncogeneEPB41L3andpromotethemetast