舒林酸对实验性脑缺血大鼠的神经保护作用及其通过上调wntβ-catenin信号通路发挥作用的机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文舒林酸对实验性脑缺血大鼠的神经保护作用及其通过上调Wnt/β--catenin信号通路发挥作用的机制研究姓名：邢演雪申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：张祥建201203中文摘要舒林酸对实验性脑缺血大鼠的神经保护作用及其通过上调Wnt／13-catenin信号通路发挥作用的机制研究摘要目的：缺血性卒中具有高患病率且已成为成年人致死、致残的主要原因。越来越多的证据表明炎症反应在脑缺血后损伤扩大化的过程中发挥着重要作用。舒林酸作为一个环氧合酶抑制物以及非甾体类抗炎药具有良好的抗炎性能。然而其对急性缺血脑组织是否具有保护性作

2、用尚未知晓，其对缺血脑组织的保护性作用机制更是无从而知。Writ／J3．Catenin信号通路在成熟和未成熟的生命组织中通过调节诸如claudin．5和Bcl。2之类物质的基因表达而发挥其维持神经元内环境稳定的作用。在脑缺血中，Wnt／p．Catenin信号通路受到抑制并参与了神经元死亡的病生理过程。由此可推知，能提高Wnt／p．Catenin信号通路活性的药物将对缺血脑组织具有保护作用。本实验目的在于探索舒林酸潜在的神经保护作用及其机制：即是否与激活Wnt／13．Catenin信号通路相关。方法：依照Longa之前描述的方法，用成年Sprague

3、．Dawley大鼠制作永久性大脑中动脉闭塞(permanentmiddlecerebralarteryocllusion，pMCAO)的模型。药物依照各组的实验设计安排在制造模型前30min按不同剂量经口服给予实验动物。所有的实验用大鼠被随机分入五个实验组：假手术组(假手术组动物口服对照溶剂0．01MPBS后被施以假手术操作)；溶剂对照组(实验动物口服对照溶剂0．01MPBS后被施以pMCAO手术操作)；低剂量组(实验动物按4mg／kg剂量口服舒林酸后被施以pMCAO手术操作)；中剂量组(实验动物按10mg／kg剂量口服舒林酸后被施以pMCAO手术

4、操作)；大剂量组(实验动物按20mg／kg剂量口服舒林酸后被施以pMCAO手术操作)。在手术操作完成24h后，评估所有实验动物的行为学缺失情况并给予评分，然后处死取材，采用干一湿重法测量脑组织含水量，TTC染色测定梗塞面积，并同时采用免疫组织化学、蛋白免疫印迹(westernblot)、反转录酶一聚合酶链锁反应(reversetranscription—polymerasechainreaction，RT-PCR)法测定Wnt／p—catenin信号通路中信号物质散乱蛋白(Dishevelled，Dvl)、结肠腺瘤样息肉病基因中文摘要产物(aden

5、omatouspoliosiscoli，APC)、磷酸化的p连环蛋白(P．p．catenin)和13连环蛋白(13-catenin)的表达以及受到该信号通路调节的Bcl．2、Bax和水闸蛋白．5(claudin．5)的表达。结果：l在制作pMCAO模型24h后，与溶剂对照组相比高剂量组的行为学缺失评分显著降低(尸O．05)。2假手术组脑组织的含水量百分比约为79．204-0．73％左右。行pMCAO操作后，溶剂对照组大鼠脑组织梗塞侧的含水量

6、则增多至85．32±1．05％左右。与溶剂对照组相比，缺血性卒中后中剂量组和高剂量组明显降低了梗塞侧脑组织增多的含水量(中剂量组含水量约为：84．20±0．62％，与溶剂对照组85．32±1．05％相比P0．05)。3在溶剂对照组中可见波及皮层及纹状体区的广泛损害。小剂量组与溶剂对照组的梗塞体积相比没

7、有明显的统计学差异(P>O．05)，而中剂量和高剂量的舒林酸能显著降低广泛的梗塞体积(与溶剂对照组相比尸<0．05)。4在脑缺血24h后，溶剂对照组中上调Wnt／p．catenin信号通路的Dvl和13-catenin分子的表达受到抑制而下调Wnt／p．catenin信号通路的APC和P．p．catenin分子却被明显上调。中、高剂量的舒林酸能够修复这些改变。而与溶剂对照组相比，低剂量组大鼠脑组织中上述四个指标的变化无统计学差异。5本实验与既往实验研究得出一致的结论：脑缺血会显著提高促凋亡信号Bax的表达并同时降低抗凋亡信号Bcl．2的表达。在pM

8、CAO模型建立24h，与溶剂对照组相比，中剂量和高剂量的舒林酸显著升高了Bcl．2的表达，并减少了Bax的表达。但低剂量的