肝癌复发转移相关因子mina和gata家族转录因子的基础和临床研究

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1、复旦大学博士学位论文肝癌复发转移相关因子Mina和GATA家族转录因子的基础和临床研究姓名：李艺伟申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：樊嘉2012-03-06博士论文中文摘要原发性肝癌在全球各种恶性肿瘤中发病率位居第五，病死率位居第三。在我国，原发性肝癌占全球的53％左右，其中80％以上是肝细胞癌，是第二位恶性肿瘤死亡原因。尽管过去几十年肝癌研究取得了可喜进展，但整个肝癌人群5年生存率仍只有5％左右。即使是根治性切除术后，5年复发率仍高达60．70％，术后高复发转移是响肝癌远期疗效的重要因素。因此，探寻肝癌复发转移相关分子机制对于提高肝癌疗效

2、具有重要意义。Mina(MycInducedNuclearAntigen，Mina53)编码的蛋白分子量为53kDa，它主要定位于细胞核，部分浓缩于核仁。最初基于人早幼粒细胞白血病HL．60细胞系的研究发现它是癌基因c．myc的下游基因，受c．myc的直接调控参与细胞增殖过程。后续的研究发现Mina在肺癌、食管癌、结肠癌等组织中过表达且与患者不良预后相关，这可能与其促进肿瘤细胞增殖(Ki．67或PCNA免疫组化染色)有关。然而，作为癌基因c．myc直接的下游靶基因，Mina在肿瘤组织的表达水平并非总是与c-myc一致。它在早期肺癌的过表达甚至与患

3、者良好预后相关，这与它作为c．myc共表达基因促进肿瘤增殖的身份不相吻合。从结构上说，Mina第128．271位氨基酸代表一个JmjC结构域，因此可能作为潜在的组蛋白甲基化调控酶。有研究表明，在非小细胞肺癌Mina可通过H3K9me3去甲基化调控核糖体基因的表达。此外，除了肿瘤细胞，Mina还可表达于间质细胞，例如来源于矿工的肺泡巨噬细胞和肝癌浸润淋巴细胞。新近更有研究表明，Mina可抑制IL-4的表达而使免疫平衡由Th2向Thl倾斜，而这种免疫平衡的偏移己被证实与人类多种肿瘤预后改善相关。以上结果提示Mina生物学功能的多样性，它可能并非只是c

4、-myc的附属品，而可独立于c．mye影响细胞增殖以外的其他过程。有日本学者分析了53例外科切除肝癌组织标本免疫组化染色的结果发现：Mina在肝癌组织广泛过表达，且与细胞分化差、肿瘤直径大于2cm显著相关。然而，该研究并未提供肝癌组织Mina过表达的预后价值，它对肝癌细胞增殖、生长和侵袭等过程的影响也未经体外、体内实验加以证实。因此，关于Mina与肝癌进展的关系也就不得而知。GATA家族转录因子由一类含有1个或2个C2．C2锌指结构、从而能够识别DNA中～T-GArA．A／G序列的蛋白组成，他们在器官发育和种系特化中具有重要作用。GATA家族含有

5、六个成员，各自在不同的组织和器官具有特异性表达。GATAl和GATA2目前为止被认为是造血系统相关因子，在血液系统肿瘤领域被广泛研究。GATA3是经典的Th2淋巴细胞转录因子，决定CD4+幼稚T淋巴细胞向Th2亚型分化，同时在乳腺癌和胰腺癌的发生发展过程中具有重要作用，是乳腺癌重要的抑癌基因，对肿瘤的预后可能具有“双面性”。GATA4、GATA5和博士论文中文摘要GATA6主要是内胚层因子，被证实在内胚层来源器官的正常或肿瘤组织中存在差异表达。GATA4、GATA5或GATA6由于启动子甲基化或核-浆转运机制异常导致的异位表达引起的失功能在肺癌、

6、消化道肿瘤和卵巢癌中很常见，它可导致上皮细胞特异性标记物失表达而引起细胞去分化或下调抑癌基因潜在的靶基因。因此，靶向于GATA家族启动子甲基化或者核．浆转运机制异常是潜在的抗癌新疗法。肝脏属于内胚层起源器官，来自老鼠胚胎内胚层细胞的研究提示，在血清白蛋白基因肝脏特异性转录增强子区域存在GATA家族基因特异的结合位点，这种现象持续于肝脏发育的整个过程中，是血清白蛋白基因转录活性所不可缺少的。目前已有学者报道GATA家族转录因子表达于人肝癌细胞系HepRG、HepG2和Hep3B，并且与内皮细胞生长因子诱导的核酸切除修复活性及ERCCl的表达有关，而

7、后者是铂类化疗在人类多种肿瘤产生耐药的重要机制之一。然而，目前没有任何报道研究GATA家族在肝癌和癌旁组织的表达模式及其对肝癌术后复发转移的影响。本课题拟研究Mina和GATA家族转录因子在正常肝和肝癌细胞系的表达；通过高通量组织芯片免疫组化技术分析它们在肝癌和配对癌旁组织的表达模式、与患者临床病理特征的关系及预后价值：借助慢病毒载体、裸鼠皮下瘤和裸鼠原位瘤模型研究Mina对于肝癌生物学特性的影响，试图寻找预测肝癌患者术后复发转移潜在的生物标记物。第一部分、肝癌组织Mina表达下降与患者不良预后相关目的：研究Mina蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系以

8、及肝癌和配对癌旁组织的表达水平，分析其与肝癌细胞系转移潜能、患者临床病理特征和预后的关系。方法：我们首先通过蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光分