组蛋白去乙酰化酶抑制剂lbh589在利妥昔单抗耐药淋巴瘤的作用及其机制的实验研究

《组蛋白去乙酰化酶抑制剂lbh589在利妥昔单抗耐药淋巴瘤的作用及其机制的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589在利妥昔单抗耐药淋巴瘤的作用及其机制的实验研究姓名：高哲申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：高玉环201203中文摘要组蛋白去乙酰化酶抑$1J葫qJLBH589对利妥昔单抗耐药淋巴瘤的作用及其机制的实验研究摘要目的：自从抗CD20单克隆抗体——利妥昔单抗(Rituximab)应用于CD20+B细胞淋巴瘤治疗以来，其单药或与传统化疗药物联合应用，疗效上有了很大提高，能显著提高患者的完全缓解率(CR)、总有效率(OER)和总生存率(OS)，但仍有近半数患者复发或难治。对利妥昔单抗耐药淋巴瘤采取何种治疗手段，已

2、成为临床上迫切需要解决的问题。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)是一类新型抗肿瘤药物，通过抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性，诱导靶细胞中组蛋白高度乙酰化，改变组蛋白与DNA链间的结合状态，启动某些特异性基因表达，体外试验已证实它对多种肿瘤细胞，包括膀胱癌、胃癌等实体瘤，以及血液系统恶性肿瘤，如淋巴瘤等，均有抑制增殖、诱导再分化和促进凋亡作用。但目前对利妥昔单抗耐药淋巴瘤细胞株是否有作用以及相关机制，国内外尚无相关文献报道。本实验旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂一BH589在利妥昔单抗耐药的人Burkitt淋巴瘤细胞株(RRCL)的作用及其可能的机制。方法：l

3、肿瘤细胞的传代培养：将人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji禾I]RRCL用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI．1640培养基培养，置于37℃、5％C02、饱和湿度条件下定期换液传代，取对数生长期细胞用于实验。2MTT法：通过酶联仪测量Raji细胞及RRCL的分光光度值(OD值)，检测LBH589对两种肿瘤细胞的作用：取对数生长期Raji细胞和RRCL接种于96孔板，利用DMSO溶解LBH589，经预实验筛选有效浓度后，调整LBH589的终浓度分别为10nM、500nM、5000nM、10000nM、25000nM，设为5个实验组，分别加入96孔板，每浓度5个复孔，

4、常规设相应DMSO含量的阴性对照组及加培基实验对照组，培养24、48、72tJ,时后，四甲基偶氮唑蓝(MTT)LL色法测定OD值，计算抑制率。3选取10nM、500nM、5000nM="个浓度作为处理浓度，利用流式细胞仪中文摘要检测凋亡率、细胞周期及其相关蛋(jBcl．2、Fas的表达水平变化。4经预实验筛选有效浓度后，调整LBH589终浓度分别为0．5nM、lnM、2nM，处理两种细胞24．48dx时，流式细胞术检测CD20蛋白表达情况。结果：1MTT法检钡SJLBH589对Raji细胞和RRCL的影响Raji细胞及RRCL经不同浓度(10nM、500nM、500

5、0nM、10000riM、25000nM)LBH589作用24h．72h后，MTT法检测其OD值均有不同程度减低，抑制率逐渐增高。不同浓度LBH589处理相同时间，两种细胞株的抑制率均逐渐增高；相同浓度、不同处理时间，在一定时间范围内，随其逐渐延长，Raji细胞和RRCL的抑制率也呈不同程度增高。LBH589对两种细胞株均有抗增殖活性。析因设计资料的方差分析显示：对于Raji细胞，时间与浓度单因素对抑制率有影响，时间和浓度无交互作用；对于RRCL，时间与浓度单因素对抑制率有影响，且时间和浓度存在交互作用。两因素S-N．K法多重比较显示：对于Raji细胞，在LBH58

6、9的5个处理浓度组中，除500nM与5000nM、5000nM与10000nM夕t-，其余任两组间比较均有统计学差异(P

7、589浓度(10nM、500nM、5000nM)的增加，Raji细胞及RRCL细胞凋亡峰值增加，细胞凋亡率增高，空白对照组与各实验组比较，差异有统计学意义(尸