河南省h9 aiv、ndv和ibv的流行病学调查及h9 aiv ha、na基因序列分析

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1、河南农业大学硕士学位论文河南省H9AIV、NDV和IBV的流行病学调查及H9AIVHA、NA基因序列分析姓名：岳旭龙申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：李新生201205河南农业大学2012届硕士学位论文摘要禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎是三种严重危害家禽养殖业的常见传染病。在世界许多地区流行，往往造成巨大经济损失。为了解河南省H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行情况。从河南省15个地市发病鸡场采集病鸡组织样品309份，采用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒，并利用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HD乘IRT．PCR试验对分离毒株进行鉴定。结果

2、表明，3类病毒的总检出率为26．54％，其中NDV、IBV和AIV(H9)的检出率分别为l1．00％、3．88％和11．65％。2010年10月NDV和IBV检出率均最高，分别为30．00％、15．00％，2011年1月AIV(H9)检出率最高，为43．24％。2类病毒混合感染的检出率达3．24％。表明2010年7月一2011年4月H9弧型禽流感、新城疫以及鸡传染性支气管炎在河南省部分地区普遍流行，且存在一定程度的混合感染。对8株H9皿型禽流感病毒分离株HA、NA基因进行序列分析。结果表明8株分离株的HA基因片段均为1742bp，ORF全长1683bp，位置

3、均为34．1716位核苷酸，均编码560个氨基酸。HA基因的核苷酸及推导氨基酸同源性分别为92．8％--99．7％和94．70／旷99．6％。NA基因片段均为1458bp，ORF全长1401bp，伉置均为20．1420位核苷酸，均编码466个氦基酸。NA基因核苷酸及推导氨基酸同源性分别为93．1％99．8和93．20／'0,．．99．8％。对禽流感病毒致病性、宿主选择性相关氨基酸位点的分析显示，8株河南分离株在HA裂解位点处存在3种氨基酸排列顺序，分别为PSRSSRIGLF、PSKSSRIGLF和PVRSSR上GLF，仅有K和R为碱性氨基酸，符合低致病性禽流

4、感病毒裂解位点的氨基酸序列特征。HA基因受体结合位点第198位氨基酸DK／HK／Y280197为T，XM．XQl与CK／SH／F／98相同为A，其余分离株均为V。313位氨基酸AY．X19株为D，DK／H刈Y280／97、C眺H／F／98和其他分离株均为N，315位氨基酸DK／HK／Y280／97、CK／SH／F／98和KF．XX5株为P，其余分离株均为s，这些变异导致除AY．XI9株和KF．XX5株外，其余分毒株该处增加了一个糖基化位点；其中72位氨基酸SQ．X17株为N，其余毒株为T，变异导致SQ．X17株该处增加了一个糖基化位点；168位氨基酸JZ-X

5、49株为T，导致该株在166位氨基酸增加了一个糖基化位点。所有分离株226位氨基酸为G，说明均为禽源禽流感病毒，其宿主范围均未发生变化，但234位氨基酸除XM．XQl株为Q外其余均为L，呈现了人流感受体结合特性，可能进一步对人类公共卫生造成威胁。8个分离毒株NA茎部均存在第6l、62和64位氨基酸N、I、E的缺失。NA蛋白中第86、146、200、234、402位氨基酸的糖基化位点高度保守，在神经氨酸酶的作用中至关重要。与DK／HK／Y280／97相比，除ZK．Xl和AY．X19第45位氨基酸相对保守外，其余6株在该处增加一个糖基化位点：除XM．XQl和KF

6、．XX5第264位氨基酸相对保守外，其余6株在该处增加一个糖基化位点：SQ．X17由于第33l位氨基酸改变，增加了一个糖基化位点；除XM．XQl和KF．XX5第402位氨基酸相对保守外，其余6株均发生了改变导致该处糖基化位点的缺失。1河南农业大学2012届硕士学位论文HA、NA基因系统进化树分析显示，8株河南分离株均属于欧亚谱系，HA基因进化关系最近的为DK／HK／Y280／97株，NA基因进化地位最近的为CK／SH／F／98株，且均属于以CK／BJ／I／94为代表的BeiJing．94分支，但各毒株的变异程度和进化地位有差异。这些结果为河南H9AIV、ND

7、V和IBV的流行情况、鉴别诊断及防治提供技术依据。关键词：禽流感病毒；新城疫病毒：鸡传染性支气管炎病毒；H9Ⅱ型；流行病学，HA基因；NA基冈2河南农业大学2012届硕士学位论文EpidemiologicalinvestigationofH9subtypeAIV、NDVandIBVandsequenceanalysisofH9subtypeAIVHA、NAgeneSupervisor：Prof．LiXinshengMasterCandidate：YueXvlongAbstract：Avianinfluenza。Newcastlediseaseandavian

8、infectiousbronchitisarethr