抗人adam15抗体抑制肿瘤增殖及肿瘤靶向实验研究

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3、DAMl5，ADisintegrinAndMetalloproteinase15)是近年来发现的一种与肿瘤密切相关的跨膜糖蛋白，本研究探讨抗人ADAMl5抗体与肿瘤细胞的结合和抑制其增殖的生物学特性，初步研究其体内靶向定位能力。为应用抗人ADAM15抗体进行恶性肿瘤诊断和治疗提供新方法。方法(1)用ProteinG免疫亲和层析法纯化抗人ADAMl5多克隆抗体(anti-ADAMl5抗体，由江南大学提供)；(2)用间接ELISA法检测在孵育时间为2、24、48h和抗体浓度为O、2、4、8}tg／ml的条件下该抗体与胃

4、癌细胞株HGC-27、肺癌细胞株A549以及微血管内皮细胞株HMEC一1的结合情况；(3)用MTT法测定该抗体在抗体浓度为4肛g／ml而孵育时间分别为48、72、96h的条件下对上述肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的抑制率；(4)建立胃癌细胞株HGC-27荷瘤裸鼠模型，用碘一125标记anti-ADAMl5抗体并由尾静脉注射到荷瘤裸鼠体内进行放射免疫显像，评价该抗体在体内对肿瘤的靶向定位能力。勿}甲三口7卜1．抗体浓度为2～8pg／Inl的条件下，anti-ADAMl5抗体与三种细胞株结合的OD450Ilm均高于对照组，

5、其结合程度随抗体浓度的增高而增强；孵育时间为24h或48h的结合程度明显强于2h。2．①该抗体在浓度为41xg／ml时对三种细胞株的增殖都有一定的抑制作用：当细胞培养时间为48和72h时，三种细胞株增殖测定OD490嘶实验组与对照组相比均有明显下降；当培养时间为96h时，血管内皮细胞株HMEC一1OD490fIm实验组与对照组相比明显下降。②当培养时间为48h时，anti-ADAMl5抗体对胃癌HGC-27细胞及血管内皮HMEC一1细胞增殖抑制率高于肺癌A549细胞，抑制率分别为(25．74±5．93)％、中文摘要

6、抗人ADAMl5抗体抑制肿瘤增殖及肿瘤靶向实验研究(23．32土3．70)％、(13．68+4．33)％，差异具有显著统计学意义(P<0．01)。③该抗体对胃癌HGC-27细胞及血管内皮HMEC一1细胞的增殖抑制率在培养时间为72h时低于48h，抑制率分别为(14．11-{-6．25)％和(17．81+4．11)％，差异具有统计学意义(HGC-27细胞组P<0．01，HMEC—l细胞组P<0．05)。3．125I-anti-ADAMl5抗体标记率为(75．16+9．43)％，纯化后放射化学纯度可达(99．44士0．

7、21)％。125I-anti-ADAMl5抗体经尾静脉注入荷瘤鼠后，随时间延长T／NT逐渐增高，在48h肿瘤清晰显影，T／NT可达3．84士O．43。结论Anti-ADAMl5抗体与胃癌细胞、肺癌细胞以及微血管内皮细胞均能有效结合，并且对肺癌细胞、胃癌细胞及血管内皮细胞的增殖有一定的抑制作用，125I-anti-ADAMl5抗体在荷胃癌裸鼠体内具有肿瘤靶向定位能力。关键词：肿瘤；去整合素金属蛋白酶15；抗体；细胞增殖；碘一125；放射免疫显像；II作者：李亚辉指导教师：杨炳华何杨章斌Theanti-humanADA

8、Ml5antibodyexhibitedanti-proliferationandtumortargetingeffectsincancerAbstractanti-humanADAMl5antibodyexhibited·●-●一·-l···●—一●anti-prolfferationandtumortargetingetlectsincancerAbst