出凝血2凝血因子抑制物定量实验

《出凝血2凝血因子抑制物定量实验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、操作规程出凝血25.1凝血因子抑制物定量实验（第四版）出凝血25.2原理：将受检血浆与已知量的正常人某因子血浆混合，温浴一定时间后测定剩余该因子的活性，以Bethesda单位来计算抑制物的含量，一个Bethesda单位相当于灭活50%该因子的量。出凝血25.3标本处理：患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻

2、轻颠倒混匀，避免用力震荡。全血要在1小时内分离血浆。分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在0.5～1.0ml的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。出凝血25.4试剂：试剂购于天津威士达公司1）APTT试剂：德灵Actin试剂（试剂盒代号527165）。每瓶试剂内含磷脂（从兔脑中提取），1.0×104mo

3、l/L糅花酸，稳定剂；共2ml。2）PT试剂：德灵ThromborelS4操作规程试剂,试剂盒代号OUHP29。试剂包括人脑凝血活酶冻干粉；氯化钙和稳定剂。每瓶试剂用蒸馏水4ml复溶。室温平衡15min后上机分析。1）各种相应的乏因子血浆（德灵）2）0.025mol/L氯化钙3）0.05mol/L咪唑缓冲液（PH7.3）：咪唑0.34g，加氯化钠0.585g，加蒸馏水100ml。从冰箱中取出后室温平衡15min后上机分析。出凝血25.5仪器：Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。HHS214型电热恒温水

4、浴锅出凝血25.6操作：将多个正常人血浆混合，作为对照血浆。用咪唑缓冲液制备受检者1/2、1/5、1/10、1/20、1/50的稀释血浆（1份受检血浆加n-1份缓冲液）。温浴混合物的制备：1）对照：对照血浆0.2ml加缓冲液0.2ml2）受检者：每种稀释度血浆各取0.2ml，分别加对照血浆0.2ml3）将上述含混合物试管置37℃水浴2小时。用测因子的方法测定各管的因子水平。出凝血25.7计算1）剩余因子浓度（%）=（受检者/对照）×100%4操作规程1）按下表将剩余的因子浓度换算成Bethesda单位。2）以Beth

5、esda单位计算因子抑制物含量。受检血浆稀释度×Bethesda单位=每毫升血浆中因子抑制物的Bethesda单位数。表：因子浓度与Bethesda单位的换算表剩余因子剩余因子剩余因子剩余因子剩余因子%单位%单位%单位%单位%单位970.05730.45550.85421.25321.65930.10700.50530.90411.30301.70900.15680.55510.95401.35291.75870.20660.60501.00381.40281.80840.25640.65481.05371.4527

6、1.85810.30610.70461.10351.50261.90780.35590.75451.15341.55252.00750.40570.80431.20331.60出凝血25.8举例：对照温浴后的因子浓度=52%受检者1/5稀释血浆与对照混合的因子浓度=35%剩余因子浓度=35/52×100%=67%从表中查得，67%剩余因子为0.575Bethesda单位稀释度×单位数=因子抑制物单位值5×0.575=2.875Bethesdau/ml血浆出凝血25.9正常参考值：应无抑制物，剩余因子浓度为100%；有

7、抑制物者，剩余因子浓度小于100%。出凝血25.10临床意义：测定凝血因子VIII的抑制物仅限于血友病甲患者出现抗因子VIII抗体者，对其他原因所致抗因子VIII抗体者不甚敏感。4操作规程血循环中偶见存在抗因子XII、XI、IX、VII、V、II的抗体，在上述因子缺乏者应用血或血液制品替代治疗的患者，也偶见于免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等。出凝血25.11参考文献：1）主编王鸿利.止血与血栓检验技术.（第一版1992.6）上海科学技术出版社.2）主编李家增王鸿利韩忠朝.血液实验

8、学.(第一版1997.10)上海科学技术出版社.3）主编邓家栋杨崇礼杨天楹.临床血液学.(第一版1985)上海科学技术出版社.4）主编邓家栋杨天楹杨崇礼.血液学实验诊断.(第一版1985)天津出版社.5）中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第一版1991）.东南大学出版社.4