兔骨髓间质干细胞的成骨细胞、软骨细胞分化研究

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1、遵义医学院硕士学位论文兔骨髓间质干细胞的成骨细胞、软骨细胞分化研究姓名：黄飞日申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：刘铎201205遵义医学院硕士学位论文中文摘要兔骨髓问充质千细胞的成骨细胞、软骨细胞分化研究中文摘要目的建立体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法。初步探讨BMSCs可定向分化为成骨细胞、软骨细胞的途径。方法抽取家兔骨髓液，．用淋巴细胞分离液梯度离，fl,获得单个核细胞，经原代培养及传代培养，选择状态良好、经过3次传代的细胞与原代细胞一起用于下面实验。(1)诱导BMSCs向成骨细胞转化：向培养液内加入地塞米松1×100mol／L，t3．磷酸甘油钠10retool

2、／L，维生素C5099／mL诱导培养后，行碱性磷酸酶活性检查和Vonkossa染色检查。(2)向培养基中添加不同质量浓度bFGF，行MTT检测(3)诱导BMSCs向软骨细胞转化：向培养液内加入地塞米松l×10～mol／L、维生素C5099／mL、bFGFlong／mL，培养1周后将bFGF换为TGF．B10ng／mL，继续培养3周，行甲苯胺蓝染色，RT-PCR技术检测Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达。结果(1)经地塞米松、13．磷酸甘油钠及维生素c诱导培养3．4周后，BMSCs转化为成骨细胞，实验组ALP活性明显高于对照组，Vonkossa染色阳性。(2)10ng／mL的bFGF对BMSCs的促

3、增值能力最强。(3)BMSCs经软骨诱导分化后骨髓间充质干细胞呈软骨细胞形态，甲苯胺蓝染色阳性，PCR证实转化前的细胞主要表达I型胶原rnRNA。转化后的细胞主要表达II型胶原mRNA。II型胶原和聚集蛋白聚糖的表达阳性。结论兔骨髓间充质干细胞可定向分化为成骨细胞、软骨细胞。关键词骨髓间充质干细胞，诱导培养，PCR，软骨细胞，成骨细胞遵义医学院硕士学位论文英文摘要TheresearchingonOsteoblastsandCartilagedifferentiationofrabbitbonemarrowmesenehymalstemcellsAbstructObjectiveToestab

4、lishamethodisolatingandculturingrabbitbonemarrowstromalcells(BMSCs)，afavorableconditionsinducingchondrogenicdifferentiationandmakeanartificialcartilaginousexplantsusingthedifferentiatedchondrocytes．Thentorepairthedefectsofrabbitarticularcartilageusingthisexplants．MethodExtractofrabbitbonemarrow3-4m

5、L，usingthelymphocyteseparationmediumtoobtainmononuclearcellsbygradientcentrifugation，primarycultureandsubcultureinvitro．Thefollowingexperimentadoptionprimarycellsandtheplummycellsafterfivepassages．(1)InducingtransformationofBMSCstothereticulodromousinterstitialcell：addingdexamethasone，bFGF，andvitam

6、inCintotheculturemediuminordertoinducingthecelltransformation．(2)InducingtransformationofBMSCstotheosteoblasts：addingdexamethasone，D—glycerophosphatesodiumandvitaminCintotheculturemediuminordertoinducingthecelltransformation，anddetectthedifferencesoftheactivityofalkalinephosphatase．(3)Inducingtrans

7、formationofBMSCstothechondrocytes：Addingdexamethasone，50ug／mlvitaminC，10ng／mLbFGFintotheculturemediumoftheplummyBMSCsafter2-3passagesforoneweek，thenchange10ng／mLbFGFtol0ng／mLTGF-p，andkeeponculturefor3weeks．