人参皂甙rg3不同构型免疫佐剂作用和抗氧化作用及其机理的研究

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1、广西大学博士学位论文人参皂甙Rg3不同构型免疫佐剂作用和抗氧化作用及其机理的研究姓名：韦晓洁申请学位级别：博士专业：预防兽医学指导教师：胡庭俊；胡松华201206人参皂甙R93不同构型免疫佐剂作用和抗氧化作用及其机理的研究㈣瞅摘要人参皂苷R93(ginsenoside—R93)属于原人参二醇型皂苷，是一种从人参(PanaxginsengC．A．Meyer)中分离提取出来的天然化合物。由于其对肿瘤细胞有很强的抑制作用，所以在人医临床被广泛用于治疗各种肿瘤疾病。R93在自然界中存在20．c键的两种差向异构体，即20(R)．R93

2、和20(S)-R93，近年来研究表明两种I沁3异构体在许多免疫活性研究中存在显著差异。因此，本论文通过研究R93两种异构体的免疫佐剂作用、抗氧化作用和对巨噬细胞功能的调节作用，研究R93两种异构体的免疫学特性，并比较两者间免疫活性的差异。1R。93不同构型免疫佐剂作用的研究目的：采用OVA作为模式抗原，探讨R93两种不同构型的免疫佐剂作用和对小鼠Thl／Th2免疫平衡的调节机制。方法：将32只BALB／e小鼠随机分为4组，分别为生理盐水对照组、OVA对照组、OVA+20(R)-R93佐剂组和OVA+20(S)一R93佐剂组。

3、第一次免疫后，间隔3周再免疫第二次。分别采集一免和二免后第14天小鼠血液，并检测血清IgM抗体水平、IgG及其亚类抗体水平。二免后第14天，所有供试小鼠处死并分离培养脾脏淋巴细胞，RT-PCR法检测OVA抗原刺激后脾淋巴细胞中相关细胞因子的表达；采用MTT法测脾淋巴细胞增殖试验；Western．blot法检测血清中细胞因子的表达。结果：20(R)-R93或20(S)．R93做为免疫佐剂与OVA对照组相比，均能显著提高小鼠一免和二免后血清中抗OVA特异性IgG及其亚类(IgGl，IgG2a，IgG2b，IgG3)和IgM水平；

4、促进小鼠脾淋巴体外增殖(P

5、具有明显的免疫佐剂效应，并且能调节机体Thl／Th2免疫平衡，20(R)-R93免疫佐剂效果优于其异构体20(s)-R93。2R．93不同构型抗氧化作用的研究目的：用环磷酰胺(CyclophosphamideCy)建立小鼠免疫抑制模型，在此基础上应用20(R)．R93和20(S)．R93处理小鼠，观察20(R)一R93和20(s)一R93对免疫抑制小鼠胸腺指数、脾脏指数、酸性磷酸酶(AcidPhosphataseACP)、超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutaseSOD)、一氧化氮(NitricOxideNO)、

6、溶菌酶(LysozymeLZM)、总抗氧化能力(TotalAntioxidantCapacityT-AOC)、黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidaseXOD)、过氧化氢酶(CatalaseCAT)和丙二醛(MalondialdehydeMDA)等免疫学和抗氧化指标的影响，探讨20(R)．R93和20(S)-R93对小鼠抗氧化能力的调节作用。结果{20(R)·R93或20(S)一R93均可提高由Cy诱导的免疫抑制导致降低的小鼠胸腺指数、脾脏指数、ACP活性、SOD活性、LZM活性、T-AOC和CAT活性；降低Cy诱导的NO

7、、XOD活性和MDA水平的升高。结果表明，20(R)一R93和20(s)一R93均能对抗cy诱导的小鼠免疫抑制，具有明显的抗氧化作用，20(R)一R93抗氧化活性优于其异构体20(s)一R93。3a93不同构型对巨噬细胞功能调节作用的研究目的：体外分析20(R)．R93和20(s)．R93对巨噬细胞系RAW264．7呼吸爆发和吞噬活性的影响及诱导鼠源巨噬细胞的细胞因子(IL一10和TNF．0【)和NuclearfactorkappaB(NF—vd3)分泌的作用。方法：实验一经20(R)一R93或20(s)一R93预培养的RA

8、W264．7，用二氢诺丹明(Dihydrorhodaminel23DHR)处理后，与粉红色荧光乳胶微球共同培养，由于细胞的呼吸爆发作用可引起细胞内本身不发光的DHR转化为发绿色荧光的诺丹明(RhodamineROD)，用流式细胞仪和激光其聚焦显微镜同时测定粉红色荧光(代表细胞吞噬或粘附粉红