《ピペット当番プロトコール》doc版

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1、羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蚁肅芄芁薇肄羃蒇蒃蚀肆芀荿虿芈蒅螇虿羈莈蚃蚈肀薃蕿蚇膂莆蒅蚆芄腿螄蚅羄莄蚀螄肆膇薆螃腿莃蒂螃袈膆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芅葿蕿蝿羅节蒅螈肇蒈莁袇膀芀虿袇衿蒆薅袆肂艿薁袅膄薄蒇袄芆莇螆袃羆膀蚂袂肈莅薈羂膀膈蒄羁袀莄莀羀羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蚁肅芄芁薇肄羃蒇蒃蚀肆芀荿虿芈蒅螇虿羈莈蚃蚈肀薃蕿蚇膂莆蒅蚆芄腿螄蚅羄莄蚀螄肆膇薆螃腿莃蒂螃袈膆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芅葿蕿蝿羅节蒅螈肇蒈莁袇膀芀虿袇衿蒆薅袆肂艿薁袅膄薄蒇袄芆莇螆袃羆膀蚂袂肈莅薈羂膀膈蒄羁袀莄莀羀羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蚁肅芄芁薇肄羃蒇蒃蚀

2、肆芀荿虿芈蒅螇虿羈莈蚃蚈肀薃蕿蚇膂莆蒅蚆芄腿螄蚅羄莄蚀螄肆膇薆螃腿莃蒂螃袈膆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芅葿蕿蝿羅节蒅螈肇蒈莁袇膀芀虿袇衿蒆薅袆肂艿薁袅膄薄蒇袄芆莇螆袃羆膀蚂袂肈莅薈羂膀膈蒄羁袀莄莀羀羂膆蚈罿膅莂蚄羈芇芅薀羇羇蒀蒆羆聿芃螅羆膁葿蚁肅芄芁薇肄羃蒇蒃蚀肆芀荿ピペット当番プロトコール改訂Ver1.02003.09　梶谷尚世毎日の仕事・朝、培養室の廃液を捨てて、ピュ－ラックスを入れてもとの場所に置く。・ピペットを乾熱滅菌器から培養室に運ぶ(新しい缶が一番下になるように並べる)。・フィルター・シリンジの洗浄。・乾燥させたピペットを缶に詰めて、乾熱滅菌器にかける。(夕方)火

3、曜日・液体窒素補充日曜日・硫酸層のＬ-100希釈液、及びDWの入れ換え。・超音波洗浄層を洗浄し、L-100希釈液を満たす。・超音波装置の横にある洗浄槽の水を抜き、新しい水道水を入れ、L-100を約10ml加える。・2F及び3Fの試薬用の長いピペットの入っているピペットかごの回収、洗浄。・DWのプレフィルター洗浄。・サイフォンに水垢が付いていたら、洗浄（特に夏場が多い）。・3F実験室の超音波洗浄機の洗浄。・培養室のwaterbathの洗浄。Waterbathの水には少量のハイアミンを加える。＊ハイアミンを加えることにより雑菌が繁殖しにくくなる。＊ハイアミンの量が多すぎると

4、泡立ってしまうので注意。その他の仕事・フィルターは切らさないように作成する。・15mlチューブは溜まったら洗浄する。・培養試薬の作成。ピペットの卸し方・新しいピペットをプラスチックのピペットかごに入れる。＊決してステンレス製のピペットかごには入れない。・硫酸層の0.1%HClにovernightで浸す。・超音波洗浄。・液体窒素の分注について毎週火曜日Ｐ２実験室にある細胞ストック槽赤蓋（６つ、オレンジ蓋１つ）へ液体窒素補充を行う。液体窒素の量は各ストック槽内の細胞が入った箱の上端以上となるようにする。また、液体窒素の量は直接観察するのは困難な為、Ｐ２にあるビーカー付き鉄棒

5、をつっこんで確認する。注意点：入れるのが最後の方になるストック槽（特にオレンジ槽）では液体窒が不足になりやすいので、バランスよくみること。また、液体窒素をじかに浴びると危険なので気を付けること。作業を行う時はドアを開けて新鮮な空気が入るようにし、密室状態で作業しないこと（気化窒素が溜まって呼吸が出来なくなることがある）。何か問題があった場合（特に液体窒素の不足に関して、また120L自動供給装置のemptysignalが出ているようであれば）は必ずすぐに責任者に報告すること。フィルターとシリンジの洗浄１、毎朝９時にバケツに入ったフィルターとシリンジを超音波洗浄機にかける。

6、①培養室に置いてあるフィルターとシリンジの入ったバケツを洗浄室に持って来る。洗浄用の長方形のかごにフィルターとシリンジを移して、洗浄槽に浸し、蓋をする。（この際、フィルターとシリンジが上下バラバラになっていることを確認して洗浄すること）②超音波装置のスイッチが洗浄槽の方に入っているか確認（シールの色で確認）して、十分間洗浄する。この間にバケツを軽くすすぎ、バケツの容量の約半分量水道水を入れ、L-100を約10ml加え、培養室の元の場所へ戻しておく。２、灌流する（６時間）。③洗浄槽からかごを取り出し、水を十分切ってから流しに持っていき、水道水で軽く洗う（表面の洗剤を取る程

7、度でよい）。④蓋付きの灌流用かごに移してピペットと同じように６時間灌流する（きちんと灌流できているか途中で確認すること）。３、乾燥させる。⑤灌流後、水を良く切り、DWに浸ける。このとき、上部のフィルターとシリンジは浸らないので、上下逆さにしてもう一度浸す。⑥乾燥機にフィルターとシリンジの入ったかごを入れる。入れる際には、水切りを十分してから乾燥機に入れる（安定に早く乾燥させるためには必要）。目安としては２～３時間だが、完全に乾燥するまで乾燥機の中に入れておく。４、所定の位置に戻す。⑦完全に乾いていることを確認してから、フィルターは大小区別