eef-2激酶抑制剂对恶性脑胶质瘤治疗的增效作用及其机制研究

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3、其可能的分子机制。方法：我们使用eEF．2激酶siRNA和eEF．2激酶小分子抑制剂NHl25靶向抑制eEF．2激酶，联合使用化疗药物TMZ，利用人类神经胶质瘤细胞系和原位脑胶质瘤异种移植模型，采用细胞、分子生物学和动物实验等方法，在体外和体内进行综合性的研究。在体外实验中，我们将体外培养的胶质瘤细胞LN229或U251，分别接受TMZ、eEF．2激酶抑制剂或联合这两种药物不同处理。通过CCK．8法检测不同处理组肿瘤细胞的增殖活性，采用划痕法、Matrigel法分别检测肿瘤细胞的迁移、侵袭能力的变化，验证其体外抗恶性脑肿瘤细胞的治疗作用。在体内

4、实验中，建立LN229原位异种神经胶质瘤细胞移植动物模型，再分别给予NS、TMZ、NHl25单独用药和TMZ-I-NHl25联合用药的不同治疗。观察记录荷瘤裸小鼠联合用药以后体重、饮食状况及精神状态等生长情况的变化，并分别于接种后7、14和21d处死动物并进行解剖学、病理形态学(HE染色)及免疫组化检查，绘制Kaplan．Meier生存曲线并比较不同药物处理组动物的生命延长率，评估其对原位胶质瘤移植动物的治疗效果。另外，在体外机制研究实验中，WesternBlot法检测不同药物处理组的eEF．2激酶活性、自噬和凋亡相关蛋白表达的变化，流式FIT

5、C．AnnexinV／PI双染法进一步检测细胞凋亡的情况，研究其可能的相关机制。结果：体外研究结果显示：与TMZ、eEF．2激酶抑制剂单独用药相比，两药联合应用联合治疗以后CCK．8法结果表明，神经胶质瘤细胞的增殖能力受到明显的抑制；划痕法和Matrigel法结果表明，神经胶质瘤细胞的迁移能力和侵袭能力明显的下降。即：抑制eEF．2激酶，能够增加神经胶质瘤细胞对TMZ的敏感性。体内研究结果显示：与TMZ、NHl25单独用药相比，TMZ+NHl25联合用药中文摘要eEF-2激酶抑制剂对恶性脑胶质瘤治疗的增效作用及其机制研究以后，荷瘤裸小鼠体重下降

6、速度减缓；本实验所用的药物虽然并不能治愈这些荷瘤裸小鼠，但是可以适当的延长它们的生存时间、延缓其颅内肿瘤的生长，而且在裸鼠接种后的第2．3周，各组药物的治疗效果的差异最为明显，其中以联合用药的效果最为明显。即：抑制eEF．2激酶，能够增加化疗药物TMZ对原位荷瘤裸小鼠模型的治疗效果。体外机制研究：WesternBlot结果显示，抑制eEF．2激酶，联合’TMZ治疗以后，LC3II的表达明显减少、p62的表达明显增加，即联合用药明显的抑制了自噬的激活；抑制eEF一2激酶，联合化疗药物TMZ治疗以后，CleavedCaspase3的表达明显增加，C

7、leavedPARP的表达也明显增加，即联合用药加强了药物诱导的细胞凋亡。流式FITC。AnnexinV／PI双染结果表明，抑制eEF一2激酶，联合化疗药物TMZ治疗以后，细胞的凋亡率和凋亡细胞数目均明显增加，即联合用药明显的诱导细胞凋亡，而且晚期凋亡细胞或坏死细胞的数目也有所增加。即：联合用药时eEF．2激酶抑制剂，可能是通过抑制自噬性存活、诱导细胞的凋亡来增加TMZ的加速细胞死亡的能力，进而增加其疗效。结论：在体外和体内实验中，eEF．2激酶抑制剂对恶性脑胶质瘤化疗药物替莫唑胺具有增效作用；其可能的作用机制是通过抑制自噬性存活、诱导细胞的凋

8、亡，促使更多的肿瘤细胞进入永久的死亡通路来实现的。关键词：恶性胶质瘤；eEF．2激酶抑制剂；TMZ；增效作用；NHl25研究生：刘晓媛指导老师：杨金铭