cd15及cd133在不同级别胶质瘤表达及其临床意义的探讨

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文CDl5及CDl33在不同级别胶质瘤表达及其临床意义的探讨CDl5及CDl33lnVeStigatlonOttheexDresslonandclinicalsignificanceT·●n’■一一‘‘一‘‘一ofCDl5andCDl33indifferentgradeofgliomas课题来源：自选专业名称学位申请人指导教师肿瘤学彭海连佘力教授答辩委员会主席陈尊器教授答辩委员会成员张为民教授夏建川教授黄宗海教授汪森明教授论文评阅人葛曰萍教授曹漫明教授2012年5月10日广州硕士学位论文CD15及CD133在不

2、同级别胶质瘤表达及其临床意义的探讨专业：肿瘤学硕士研究生：彭海连指导教师：余力教授摘要一、研究背景脑肿瘤干细胞(BTSCs)是指脑肿瘤组织中存在着一小群具有很强的自我更新能力、分化功能强、能再成瘤、对常规的放化疗有很强抵抗力的细胞，是脑肿瘤发生、转移、复发的主要原因，其数量可能与肿瘤的恶性程度及预后存在相关性。基于脑肿瘤干细胞的靶向治疗是目i，JI研究的热点之一‘。迄今为止，脑肿瘤公认的干细胞特征的细胞(包括BTSCs)表嘶标i己物是CDl33。最初研究报道认为CDl33是脑肿瘤干细胞的代名词，或至少是‘+个先决条件。然而，最近一系列研究报道

3、表明，CDl33町能不是这些细胞的绝划寸旨标。因为CDl33对BTSCs具有高选择性，而非高特异’盹，它同时也表达-j二胚胎及成人中枢神经干细胞(NSCs)、血管内皮i，J-体细胞。CDl33属十糖复合物，由于糖复合物通常都定位于细胞表面，它们的表达通常会随着细胞的发育发生大幅度的改变。此外，在『F常的发育过程中，如果肿瘤起源于二f二／祖细胞不同点，从不同系列的胶质瘤得来的脑肿瘤干细胞可能有不同的的免疫表型及其独特的二f二细胞标i己物。与造血干细胞类似的是，脑肿瘤干细胞的确定需要相应标记物的联合应用。因此寻求新的脑肿瘤干细胞标记物就非常必须且

4、迫切。2009年先后有学者报道在老鼠的髓母细胞模型中发现一种具干细胞特征的细胞，这些细胞表达表面标记物CDl5。研究人员通过不同的实验表明CDl5可以用来作为从脑川lj亩CDl33一的细中文摘要胞得来的脑肿瘤干细胞样细胞(包括干细胞、祖细胞)的标记。脑肿瘤干细胞标记物CDl5及CDl33为抗肿瘤治疗提供了新思路和可能的治疗靶点，尤其CDl5作为新发现的脑肿瘤干细胞标记物，可能为脑肿瘤基于脑肿瘤干细胞标记物的治疗提供一个新的切入点。本研究利用免疫组织化学法检测脑肿瘤干细胞标记物CDl5和CDl33的表达，探讨肿瘤组织中CDl5和CDl33阳性细

5、胞的存在、分布和临床意义，为脑肿瘤干细胞标记物的进一步研究打下基础。二、研究目的检测CDl5及CDl33在不同级别胶质瘤中的表达，探讨两种标记物之问的相关联系及其临床意义。三、实验方法1．材料与方法标本的收集：80例胶质瘤标本来源于南方医科大学附属珠江医院病理科2008年至2010年存档蜡块。所有标本均经有经验的病理医师复查确诊，有详细临床、病理资料和随访资料。男45例，女35例，平均年龄35岁。严格按照WHO(2007)脑肿瘤分类标准进行病理分类、分级：I级10例，均为神经元和混合性神经元胶质细胞肿瘤；lI级31例，其中少突胶质细胞瘤13例

6、，神经元和混合性神经元细胞肿瘤18例；Ill级9例，其中问变性少突胶质细胞瘤7例，神经元和混合性神经元细胞肿瘤2例；IV级30例，其中髓母细胞瘤10例，胶质母细胞瘤20例。I—ll级为低级别胶质j}}『，111．rv级为高级别胶质瘤，其中高级别胶质瘤39例，低级别胶质瘤41例。采用非生物素免疫组织化学法检测胶质瘤组织中CDl5和CDl33的表达。使用Image．ProPlus6．0图像分析处理软件计算CDl5与CDl33阳性细胞积分光密度(integratedopticaldensity，IOD)，比较不同级别胶质瘤CDl5+细胞与CDl33

7、+细胞IOD值有无差别，同时进行CI)15+细胞与CDl33+细胞IOD值相关分析。2．实验步骤石蜡切片脱蜡和水化后，对纰织抗原进行相应的修复。蒸馏水冲洗2次，每次硕士学位论文5min，N0．01mol／L磷酸盐缓冲溶液(Phosphatebufferedsaline，PBS)浸泡2次共10min。加入过氧化物阻断剂50—1001al阻断灭活内源性过氧化物酶，室温孵育10rain。PBS液中冲洗3minx3次；甩去PBS液，滴加强力阻断剂，室温孵育10min；滴加一抗CDl5或CDl33(用PBS缓冲液代替一抗为阴性对照)，室温孵育2小时；P

8、BS液中冲洗5minx3次；甩去PBS液，滴j3HSuperEnhancer液，室温孵育15，20rain；PBS液中冲洗3minx3次；甩去PBS液，滴JJHPo