转pgh基因猪阳性鉴定及外源基因在染色体上定位的研究

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1、PositiveIdentificationofTransgenicpGHPigandLocalizationofExogenousGeneonChromosomeThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfdlmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyJangYajun(DepartmentofAnimalScienceandTechnology)Supervisor：SunJinhaiQingdao．ChinaJune，2012独创性声明

2、本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。f3啾躲荫五洋帆年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒

3、体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：导师签名：谪砰肭饧时间：年月日年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要为探讨睾丸注射法制备转基因猪的高效性，本试验应用PCR检测、Southern印迹杂交、荧光定量PCR分析等技术，检测通过睾丸注射法制备的第一代转pGH基因猪阳性率．利用FISH杂交技术研究外源基因在染色体上的具体整合情况，对比外源基因在不同个体基因组中的整合位点与数目，为转基因动物的定向培育及研究杂交数目与目增重相互关系提供依据。1．转基因猪阳性率的鉴定为分析睾丸注射法制备的第一代转pGH基因猪阳性率，本试

4、验采用PCR检测、Southern印迹杂交、荧光定量PCR三种方法对其进行阳性鉴定。结果表明：通过PER扩增及测序的56头仔猪中39头为阳性，死淘8头中4头为阳性，则有效阳性率为72．92％(35／48)；通过对PCR测序后的阳性个体再进行Southern杂交，阳性率为54．17％；采用PCR定量分析法对16头阳性个体与16头同龄非转基因猪进行试验，发现转基因与非转基因猪达到阈值所需循环数分别为27．5206、27．7039，其中转基因猪mR．NA表达量是非转基因猪的1．17倍，表明外源DNA已整合于猪染色体上并能在子代稳定遗传，但不同个体外源基因在体内的拷

5、贝数及表达水平具有差异性。2．pGH外源基因在染色体上定位研究为进一步探索通过睾丸注射法制备的Fo代转基因猪外源基因在染色体上的整合位点与数目以及对增重的影响，本试验采用FISH杂交技术分析6头转基因猪与2头非转基因猪。结果表明：转基因猪之间及其染色体上杂交信号位置与数目均不同，杂交信号主要分布在1、6、8、13号染色体上；非转基因猪染色体上无杂交信号；总体上转基因猪染色体上杂交信号数越多，其从出生到育肥期的平均日增重值越大。关键词：睾丸注射法；Southern；Real．T'maePCR；FISH青岛农业大学硕士学位论文AbstractToexploret

6、hefeasibilityandefficiencyofIransgenicpigsbytesticularmjectionprepared,PCR,SouthernandReal-TimePCRanalysistechnologywereusedtodetectpositiverateofu'ansfer-pGH·genepigs．FISHtechnologyWaSusedtoresearchtheintegrationsitesofforeigngenepGH(porcinegrowthhormone)onchromosomes，andthencontr

7、astedintegrationsitesandthenumbersofdifferentindividuals’genome，whichwasinordertogetbasisfordirectedcultivationoftransgenicanimalsandgainrelationshipofhybridizationnumbersandaveragedaily．1．PositiverateofidenfificafionfortransgenicpigInordertoanalysisthepositiverateoftransfer·pGH—ge

8、nepigs(thefrostgeneration)