脂肪源性干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究

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1、复旦大学上海医学院临床硕士毕业论文脂肪源性干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究AdiposeTissue-derivedStemCellsSheetsFabricatedinVitroonTemperature-ResponsiveScaffolds研究生：韦巧玲导师：徐建江教授导师组.?张朝然副教授，龚岚副教授，王艳，乐琦骅专业：临床硕士（三年）申请学位级别：硕士研究方向：眼科学培养单位：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院关键词：组织工程；温度敏感性支架材料；脂肪源干细胞；眼表重建；口腔黏膜上皮细胞。2012年4月1

2、日复旦大学硕士学位论文中英文缩写一览表缩写英文名称中文名称ADSCsAdipose-derivedstemcells兔脂肪干细胞OMECsOralmucosalepithelialcells兔口腔黏膜上皮细胞PNIPAAmPoly-N-isopropylacrylamide异丙基丙烯酰胺CSTCellsheettechnology细胞层片技术TRSsTemperature-responsivescaffolds温度敏感性支架材料PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液EDTAEthylenedia

3、mine-tetraacidicacid乙二胺四乙酸DMEMDulbeco'smodifiedeagle'smediumDulbeco改良的Eagle培养基FBSFetalbovineserum胎牛血清HEHaemaoxylin-eosin苏木素一伊红染色SEMScanningelectronmicroscopy扫描电镜DABDiaminobenzidine二氨基联苯胺BSABovineserumalbumin小牛血清白蛋白复旦大学硕士学位论文目录1.中文摘要…32.英文摘要43...????5

4、4.正文部分4.1以异丙基丙烯酰胺为原料制备温度敏感性支架材料84.2脂肪源干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究175.参考文献336.发表及已录用待发表论文357.鍵368.蘭????..45复旦大学硕士学位论文中文摘要脂肪源性干细胞在温度敏感性支架材料上培养特性的实验研究【目的】在温度敏感性支架材料（Temperature-responsivescaffolds,TRSs)上培养兔脂肪源性干细胞（Adipose-derivedstemcells,ADSCs)、兔口

5、腔黏膜上皮细胞(Oralmucosalepithelialcells,OMECs),通过比较两种细胞体外的生长情况和生长特性，探求脂肪源干细胞作为重建眼表的种子细胞的可能性。【方法】异丙基丙烯酰胺溶于异丙醇加入35mm直径的培养皿，利用电子束照射制备温度敏感性培养皿。取兔脂肪组织及口腔黏膜上皮组织，分别消化、离心获取原代细胞，ADSCs体外培养至二代后接种于TRSs，原代OMECs直接接种于有丝裂霉素C处理过的有鼠3T3生长的TRSs中，比较两种细胞的形态、生长速度、细胞层片脱附时间、层片细胞计数、层片HE染色、细胞免疫

6、组化染色（角蛋白CK12及干细胞标志物p63、ABCG2)及其扫描电镜检查。【结果】二代ADSCs细胞呈长梭形编织状，局部呈漩涡状排列，细胞形态单一，活性强。原代OMECs呈不规则圆形、折光性强，完全伸展的细胞呈扁平的卵圆形，胞核清晰。二代ADSCs覆盖率达100%所需的生长周期为12?14天，层片脱附时间为（46±9.6)min,细胞总计数为（7.9±1.1)X105个/片;而原代OMECs所需生长周期为14?16天，层片脱附时间为（91.9±10.9)min，计数为（45.8±26.5)X105个/片，两者脱附时间及

7、细胞总计数具有统计学差别。HE染色示ADSCs细胞核呈卜3层排列，而OMECs细胞核呈4?5层覆层结构。两者角蛋白CK12及干细胞标志物P63、ABCG2均呈阳性。扫描电镜可见两者细胞均具有上皮典型微绒毛、细胞间连接紧密。【结论】通过在TRSs上培养获取的ADSCs层片可作为眼表重建的新种子来源。【关键词】组织工程；眼表重建；脂肪源干细胞；口腔粘膜上皮细胞；细胞层片技术复旦大学硕士学位论文英文摘要AdiposeTissue-derivedStemCellsSheetsFabricatedinVitroonTem

8、perature-ResponsiveScaffolds【Purposes】Rabbitadiposetissue-derivedstemcells(ADSCs)andoralmucosalepithelialcells(OMECs)werecultivatedinvitroontemperature-respons