脂肪组织来源的间充质干细胞促进胰腺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

《脂肪组织来源的间充质干细胞促进胰腺癌细胞增殖和侵袭的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、温州医学院硕士学位论文脂肪组织来源的间充质干细胞促进胰腺癌细胞增殖和侵袭的实验研究姓名：季世强申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张启瑜2012-05-24温州医学院硕士学位论文脂肪组织来源的间充质干细胞促进胰腺癌细胞增殖和侵袭的实验研究中文摘要目的：通过体外实验探讨脂肪组织来源的间充质干细胞对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响，并初探其可能的机制。方法：1．ADSCs的分离、鉴定(1)从健康成人脂肪组织中分离出间充质干细胞，置入细胞培养箱内培养。(2)细胞经培养传代至少4次后流式细胞学技术鉴定细胞的表型CD73，CD90，CD44。2．体外实验(1

2、)细胞共培养：ADSCs与胰腺癌细胞SWl990共培养48小时后，移去ADSCs，SWl990细胞中加入CCK一8，共孵育2小时后于酶标仪上450nm处读取OD值，计算细胞的增殖情况。(2)SDF一1的检测：用ELISA法检测ADSCs及SWl990细胞培养液中SDF-1的含量。(3)细胞CXCR一4的表达：PCR法检测胰腺癌细胞SWl990、PANC一1细胞及ADSCs中CXCR一4的表达。(4)细胞增殖实验：SWl990中加入不同浓度(Ong／mL，25ng／mL，50ng／mL，lOOng／mL，200ng／mL)的SDF一1培养48小时后加入

3、CCK一8检测细胞增殖情况。(5)侵袭实验：将SWl990细胞置于Matrgel胶铺设的侵袭小室上层并加入培养ADSCs的上清液，16小时后终止实验，弃小室内液体，上层细胞棉签拭去，透膜细胞染色后于显微镜下计数。结果：(1)成功从脂肪组织中提取了ADSCs，传代、纯化后经流式细胞学技术鉴定，细胞CD73(+)，CD90(+)，CD45(一)。(2)细胞共培养想结果表明，对照组0D值0．914±0．015，ADSCs组oD值为1．461±0．085，与对照组相比，ADSCs明显能够促进胰腺癌细胞SWl990的增殖。(3)EILSA检测结果表明，ADSC

4、s可以分泌SDF一1，测得值为1150．3±4温州医学院硕士学位论文139．5pg／mL，而SWl990细胞上清液中未检测到SDF一1。(4)PCR检测到胰腺癌细胞株SWl990、PANC—l细胞中CXCR-4基因的表达，而在ADSCs中仅轻度表达。(5)细胞增殖实验表明SDF-1明显能够促进SWl990细胞增殖，各浓度组(Ong／mL，25ng／mL，50ng／mL，lOOng／mL，200ng／mL)OD值分别为0．858±0．038，1．1364-0．081，1．356±0．046，1．4264-0．041，1．375±0．036，且在一定范围

5、内呈浓度依赖关系。CXCR4特异性受体阻断剂AMD3100可以抑制SDF一1的促增殖作用。(6)侵袭实验表明加入hDSCs细胞上清液的SWl990细胞透膜细胞数增加，ADSCs可以提高SWl990细胞的侵袭能力。结论：(1)本实验成功提取了ADSCs并传代、培养、鉴定。(2)ADSCs可以促进胰腺癌细胞SWl990增殖，提高SWl990的侵袭能力。(3)SDF一1／CXCR4生物轴可能在促进胰腺癌增殖和侵袭中发挥重要作用。【关键词】脂肪干细胞；胰腺癌：增殖：侵袭：基质细胞源性因子一15温州医学院硕士学位论文AdiposeTissue--Derived

6、StemCellsPromotePancreaticCancerCellsProliferationandInvasionABSTRAC’I’Objective：Toexploretheeffectsofadiposetissue—dirivedstemcellsonproliferationandinvasionofpancreaticcancercellsinvitroanditspossiblemechanismmaybeinvolved。Methods：1．IsolationandidentificationofADSCs(1)ADSCswe

7、reisolatedfromhealthpeople’Sadiposetissueandculturedincellincubator．(2)Thecells’phenotypewereidentifiedwithflowcytometry．2．Experimentsinvitro(1)CellsCO-culturingsystemADSCsandpancreaticcancercellswereCO—culturedfor48handADSCswereremoved，thencellproliferationweremeasuredbyCCK-8a

8、ssay．(2)Enzyme-linkedlmrnunosorbentassay(ELISA)TheELIS