益气化痰祛瘀胶囊对肺纤维化大鼠的实验研究

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1、湖北中医药大学博士学位论文益气化痰祛瘀胶囊对肺纤维化大鼠的实验研究姓名:薛晓明申请学位级别:博士专业:中医内科学指导教师:王鹏20120520中文摘要目的:观察益气化痰祛瘀胶囊对博莱霉素致大鼠肺纤维化(PulmonaryfibrosiS,PF)的相关细胞因子系统一纤维四项【血清中III型胶原(IItypeofC01lagen),IV型胶原(IVtypeofcollagen)及层粘连蛋白(withadhesivewhites)和透明质酸(Translucentqualityacid)】,肿瘤坏死因子(TumornecrosiSfactor-a)、转化生长因

2、子D1(transforminggrowthfactor-betaD1)的影响,进一步探讨益气化痰祛瘀胶囊治疗本病的作用机制,为该药广泛应用临床、申请专利提供实验依据。方法:60只健康WiStar大鼠,体重240±209,随机将其分为六组:正常组、模型组、阳性对照组、益气化痰祛瘀胶囊高剂量组、益气化痰祛瘀胶囊中剂量组、益气化痰祛瘀胶囊低剂量组,每组各1o只。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,将大鼠仰卧位固定于实验台上,固定头和四肢,切开颈部皮肤,暴露气管,正常组一次性气管滴注等量生理盐水,其余五组均采用经气管滴注博来霉素溶液建立肺纤维化大鼠模型,之后每日每只

3、大鼠用青霉素8万单位肌肉注射预防感染,共计3天。给药过程中观察动物的一般状况:动物活动、体型、皮毛、摄食、粪便、精神状态等。造模48h后,益气化痰祛瘀胶囊高、中、低剂量组(5.6259/kg、2.8129/kg、1.40125/kg)灌胃给药,每日一次,相当于人临床日用剂量体重比例的2o、1o和5倍;阳性对照组用醋酸泼尼松混悬液(0.25mg/kg)灌胃给药,每Et一次,相当于人临床日用计量体重比例的7.5倍。正常组与模型组生理盐水灌胃,每日一次,剂量均为1Oml/kg·bw,上述六组给药周期均为28天,次日晨起杀检,并收集样本,观察对肺纤维化大鼠造模后

4、的肺脏、胸腺和脾脏的影响,比较各组大鼠肺脏系数的变化情况;观察各组动物双肺外观差别,取右肺中叶置于1O%甲醛中固定,常规石蜡包埋,连续4Um厚石蜡切片,行HE染色,测定肺组织羟脯氨酸的含量,光镜下观察大鼠肺组织病理形态学变化;化学发光法检测血清学中的纤维四项,即III型胶原(PCIII),IV型胶原(IV)、层粘连蛋白(LN)以及透明质酸(HA)的含量;采用ABC-ELISA法检测大鼠血清细胞因子TGF-p1和TNF—a;结果(1)一般状况观察:大鼠60只,在实验期间均无死亡,正常组活泼好动,强壮肥硕,皮毛光亮,精神状态良好;模型组表现出不同程度的咳喘(

5、大约持续到7天左右),眯眼,呆滞,精神差,造模型后第3天有5只出现拱背蜷缩,皮毛晦暗,无光泽;阳性对照组实验前几天表现与模型组相似,治疗1周后有所好转,但食欲一般;中药组开始表现与模型组相似,治疗后明显好转,精神食欲较好。从体重上观察,模型组体重无明显增加,阳性对照组、益气化痰祛瘀胶囊低、中、高剂量组体重均有明显增加。与阳性对照组比较,高剂量组体重明显增加,有统计学意义(P<0.05)。(2)肺脏系数的比较:益气化痰祛瘀胶囊5.6259/kg、2.gl259/kg、1.40125/kg高、中、低三个剂量组造模给药后,高、中、低剂量组、阳性对照组肺脏系数与

6、模型组相比明显降低,有统计学意义(尸<0.05);阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组肺脏系数无明显变化,无统计学意义(尸>0.05)。(3)纤维四项比较:与模型组比较,阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组III型胶原(PCIII)、IV型胶原(IV-C)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸酶(HA)均明显降低,有统计学意义(尸<0.05)。与阳性对照组比较,益气化痰祛瘀胶囊高、中剂量组血清层粘连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)有所降低,但没有统计学差异(扮0.05).(4)病理结果显示:模型组大鼠肺泡壁明显增厚,肺弥漫性淤血出血灶性纤维化,肺泡上皮细

7、胞变性,间质大面积纤维化,淋巴细胞含铁血黄素细胞浸润,大量淋巴细胞浸润。阳性对照组肺泡壁增厚,大面积纤维化,间质淋巴细胞浸润,上皮脱落变性、坏死,淋巴细胞含铁血黄素。高剂量组大鼠肺泡壁增厚(灶性),间质轻度纤维化,淋巴细胞浸润,含铁血黄素。中剂量组大鼠肺泡壁增厚,部分大鼠轻度间质纤维化。低剂量组大鼠肺泡壁增厚,有的破裂,大面积纤维化,淋巴细胞含铁血黄色素细胞浸润。益气化痰祛瘀胶囊各治疗组与模型组相比,肺组织病理改变均有不同程度U改善,肺泡炎的程度差异具有显著性(P

8、TNF—a、TGF-D1的比较:模型组大鼠血清中TGF-D1的含量显著高于正常组

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