应用tlr8配体增强lewis肺癌小鼠抗肿瘤免疫应答

《应用tlr8配体增强lewis肺癌小鼠抗肿瘤免疫应答》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、江苏大学硕士学位论文应用TLR8配体增强Lewis肺癌小鼠抗肿瘤免疫应答姓名：朱广丽申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：顾绍庆20120605江苏大学硕士学位论文摘要目的：探讨应用TLR8配体CL075(thiazoloquinolinecompound)和Poly(dT)(thymidinehomopolymerphosphorothioateODN)刺激后，TLR8及其相关细胞因子IL．12、IL．10在小鼠DC2．4细胞中的表达情况；建立小鼠Lewis肺癌模型，观察TLR8配体对肿瘤生长的影响，●并研究其调节抗肿瘤免疫应答的机制，为临床对肺癌的

2、治疗提供新的思路和实验基础。方法：(1)常规培养DC2．4细胞，光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)束lJ激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化。(2)通过qRT-PCR；测定DC2．4细胞hhTLR8、IL．12、IL-10的mRNA表达。(3)通过ELISA测定DC2．4细胞中IL．12、IL．10的蛋白表达。(4)通过Westernblot钡,O定DC2．4细胞中TLR8的蛋白表达。(5)建立小鼠Lewis肺癌模型，观察经TLR8配体处理后肿瘤的发展进程。(6)取各实验组小鼠引流淋．巴结及脾脏利用qRT-PCR法检测TLR8

3、、IL．12、IL．10的mRNA表达水平。(7)采用流式细胞术检测小鼠体内DC细胞TLR8的表达、CD3+CD8+IFN7+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的变化情况。结果：(1)未刺激及Poly(dT)刺激组细胞较幼稚，树突较短且少；CL075署N应用TLR8配体增强I．启Wi8肺癌小鼠抗肿瘤免疫应答Poly(dT)束U激组细胞活化，树突增多且伸长。(2)Poly(dT)刺激组DC2．4细胞中TLR8、IL一12、IL一10的mRNA及蛋白表达量与阴性对照组相比均无统计学意义；CL075和Poly(dT)刺激组DC2．4细胞中TLR

4、8、IL．12的mRNA及蛋白表达量较阴性对照组明显升高(P

5、3+Treg细胞的比例明显下降，而脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例与对照组相比无明显差异。结论：(1)应用TLR8配体后，TLR8、IL．12在小鼠DC2．4细胞中的表达水平明显升高，而IL．10的表达水平则明显降低。(2)TLR8配体能够明显延缓肿瘤的进展。其主要机制是通过上调DC表面TLR8的表达，进而促进CD3+CD8+IFNY+T细胞、IL．12的产生，抑制CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、IL—lO的产生，抑制肿瘤的生长。关键词：CL075，Poly(dT)，TLR8，DC2．4细胞，Lewis肺癌，调节性T细胞

6、，效应性T细胞H江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjective：ToinvestigatetheexpressionofTLR8andtheproductionoflL-12andIL-lOinDC2．4cellaftertheapplicationofCL075(thiazoloquinolinecompound)andpoly(dT)(thymidineincorporationhomopolymerphosphorothioateODN)；ToobservewhetherTLR8ligandcanaffecttheprogressionof

7、tumordevelopmentinamouseLewis。lungcarcinomamodelandstudyitsimmunemechanisms．Toprovide．newideasandexperimentalbasisforclinicallungcancertreatment．Methods：1．RoutinelyculturedDC2．4cells，opticalmicroscopewasappliedtoobservethecellsmorphologyinthepresenceandabsenceofCL075andPoly(dT)．一

8、2．Real—timePCRwasusedtoanalyzetheexpress