腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶活性的机制研究

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1、广州医学院硕士学位论文中英文词汇对照表NHBneonatalhyperbilirubinemia新生儿高胆红素血症UGTUDP-glucuronosyltransferase尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶SAMeS-adenosyl-L-methionine腺苷蛋氨酸INicterusneonatorum新生儿黄疸BEbilirubinencephalopathy胆红素脑病IBIndirectbilirubin间接胆红素GAPDHGlceraldehydes3-phosphate三磷酸甘油醛脱氢酶dehydrogenaseH

2、OHemeOxygenase血红素加氧酶NADPHreducedformofnicotinamide-还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸adeninedinucleotidephosphateBMGbilirubinmonoglucuronide胆红素单葡萄糖醛酸酯BDGbilirubinmonoglucuronide胆红素双葡萄糖醛酸酯UDPGAuridinediphosphate尿苷二磷酸葡萄糖醛酸glucuronicacidMAPKsmitogen-activated丝裂素活化蛋白激酶proteinkinasesERK1

3、/2external-signalregulated细胞外信号调节激酶1/2kinase1/2JNKc-junN-terminalkinasec-junN末端激酶SAPKstress-activatedproteinkinase应激活化蛋白激酶1广州医学院硕士学位论文腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶活性的机制研究学科专业：儿科学学位申请人：梁淑文指导教师：崔其亮教授中文摘要新生儿高胆红素血症（neonatalhyperbilirubinemia，NHB）是新生儿时期的常见病，可引起多器官系统损害。尽快降低血清胆

4、红素水平是治疗新生儿高胆红素血症的关键。目前临床常用的治疗有光疗、换血疗法、药物治疗三个方面的措施，三者各有利弊，故寻找一种能安全、经济、有效地降低血清胆红素水平的药物对治疗新生儿高胆红素血症具有突出意义。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UDP-glucuronosyltransferase，UGT）是胆红素结合的关键酶，可使脂溶性的非结合胆红素变成水溶性的结合胆红素而排出体外。腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-methionine，SAMe）是体内内源性物质，参与体内多种重要的生化反应，可作为底物参与合成半胱氨酸、牛磺

5、酸、谷胱苷肽、辅酶A等重要物质，并作为基因供体或酶性诱导剂在人体组织三大代谢过程中起到转甲基、转硫基和丙氨化(多聚胺合成)作用。该药应用于临床已有多年，其适应证主要针对肝内胆汁郁积、肝炎高胆红素血症等黄疸，能有效降低血清结合胆红素水平，近年来国内有报道称SAMe辅助治疗新生儿高胆红素血症有一定疗效。因此，我们从分子生物学的角度，分析SAMe对人胎肝细胞（LO2）的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA表达和蛋白的生成、活性的影响。2广州医学院硕士学位论文第一部分腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA表达的研究目的

6、分别给予不同浓度、时间的SAMe干预LO2细胞，比较受干预的LO2细胞在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA水平的变化，探讨SAMe对LO2细胞UGT的mRNA表达水平的影响及最佳的干预条件。方法体外培养LO2细胞，待细胞约70%铺满培养板底部，进行分组：⑴SAMe处理组，根据预实验结果加入SAMe使其终浓度分别为1、0.5、0.1mmol/L；⑵阳性对照组，予以肝酶诱导剂，终浓度为2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可刹米；⑶阴性对照组，不作加药处理。加药培养24h、48h、72h、92h后收集细胞。通过荧光定量PCR

7、检测各组的mRNA水平。结果LO2细胞的UGT1A1mRNA经一定浓度SAMe诱导后增加，其中以浓度为0.5mmol/L组最为明显，该组经SAMe诱导24h后细胞的UGT1A1mRNA开始增高（49.18±10.16，P<0.05），48h达到高峰（130.69±9.23，P<0.05），72h后明显下降（28.25±9.42，P<0.05），此后未见明显变化；与肝酶诱导剂组比较，其诱导LO2细胞生成UGT1A1mRNA的量更多，作用时间更长（P<0.05）。结论适当浓度的SAMe对LO2细胞的UGT1A1的mRNA表达有

8、诱导生成作用，表达量及时效均比肝酶诱导剂好。关键词腺苷蛋氨酸；尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶；人胎肝细胞；UGT1A1mRNA表达3广州医学院硕士学位论文第二部分腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶蛋白表达的研究目的分别给予不同浓度、时间的SAMe干预LO2细胞，比较受干预的LO2细胞在UGT蛋白表