盐对内皮细胞肾上腺髓质素分泌和表达的影响及机制的研究

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1、?硕士学位论文盐对内皮细胞肾上腺髓质素分泌和表达的影响及机制的研究院（系）、所临床医学院研究生姓名陈海兰学科、专业内科学导师姓名李家富教授二Ο一二年四月目录1盐对内皮细胞肾上腺髓质素分泌和表达的影响及机制的研究…………………………………………………11.1中文摘要…………………………………………………11.2英文摘要…………………………………………………51.3前言………………………………………………………101.4材料与方法………………………………………………141.5结果………………………………………………………241.6讨论…………………………………………

2、……………341.7结论……………………………………………………401.8参考文献…………………………………………………411.9英汉缩略词对照表………………………………………442致谢………………………………………………………453肾上腺髓质素与高血压研究进展（综述）………………………………………………………46盐对内皮细胞肾上腺髓质素分泌和表达的影响及机制的研究摘要目的：（1）研究高盐对HUVECs增殖活性的影响。（2）研究高盐对HUVECsADM、ADMRmRNA表达的影响，探讨其可能的信号通路。(3)研究高盐对HVECs凋亡的影响及可能机制。方法：1.用

3、含10%胎牛血清的RPMI1640培养基培养HUVECs，选3-9代对数生长期的细胞进行实验。2.用不同浓度NaCl（对照组、137mmol/L、142mmol/L、147mmol/L、152mmol/L、157mmol/L）干预HVECs24h后，用CCK-8试剂盒检测盐对HUVECs增殖活性的影响。3.将实验分两部分进行，实验1：实验共分六组，分别为对照组：正常培养HUVECs未加入任何药物；137mmol/L组、142mmol/L组、147mmol/L组、152mmol/L组、157mmol/L组分别为：培养24小时后加入不同浓度NaCl，使终浓度分别为1

4、37mmol/L、142mmol/L、147mmol/L、152mmol/L、157mmol/L，继续作用24小时后，用RT-PCR检测细胞中ADM及ADMRmRNA的表达；用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测细胞培养液中ADM及ADMR浓度；用AnnexinV-FTTC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡。实验2：通过实验1选出最佳盐浓度为152mmol/L，继续进行实验。实验分六组如下：152mmol/l组：培养48小时后加入NaCl，终浓度为152mmol/L，继续作用24小时。PD98059(ERK抑制剂)组、SP600125(JNK抑制剂）组、SB2035

5、08(P38抑制剂)组、Staurosporine(PKC抑制剂)组、LY-294002（PI3K抑制剂)组：培养24小时后，先分别用PD98059、SP600125、SB203508、Staurosporine、LY-294002作用细胞24h再加入NaCl（终浓度为152mmol/L），继续作用24小时。（其中除Staurosporine为10nmol/L外，其余均为10umol/L），并以与实验1相同方法检测ADM的浓度，ADM及ADMRmRNA的表达及细胞凋亡的影响。结果：1、对照组、137mmol/L组、142mmol/L组、147mmol/L组、15

6、2mmol/L组、157mmol/L组细胞增殖活力分别为（0.998±0.197)、（0.952±0.091）、（0.946±0.076）、（0.811±0.145）、（0.802±0.116）、（0.659±0.15）。137mmol/L组、142mmol/L组、147mmol/L组、152mmol/L组与对照组比较（P>0.05），157mmol/L组与对照组比较（P<0.05）。2、RT-PCR检测内皮细胞中ADM及ADMRmRNA的表达结果显示：对照组、137mmol/L组、142mmol/L组、147mmol/L组、152mmol/L组、157mmol

7、/L组ADMmRNA的IODADM/IODGAPDH分别为0.03±0.01、0.10±0.01、0.20±0.01、0.21±0.02、0.43±0.02、0.40±0.04，各组与对照组相比（P<0.05）；对照组、137mmol/L组、142mmol/L组、147mmol/L组、152mmol/L组、157mmol/L组ADMRmRNA的IODADMR/IODGAPDH分别为0.07±0.02、0.12±0.02、0.13±0.02、0.16±0.02、0.28±0.03、0.17±0.02，各组与对照组相比P均小于0.05；152mmol/L组、PD98

8、059组、SP60012