我国动物源金黄色葡萄球菌的耐药性和分型研究

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1、刘洋：我国动物源金黄色葡萄球菌的耐药性和分型研究我国动物源金黄色葡萄球菌的耐药性和分型研究研究生：刘洋导师：焦新安教授宋立副研究员中文摘要金黄色葡萄球菌是革兰氏阳球菌，它广泛分布于自然界中，能感染人和动物，是一种重要的人兽共患病原菌；其产生的肠毒素可污染食物而致人食物中毒，严重威胁人类的食品安全和公共卫生。近年来，耐药菌株(尤其是甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌，即凇SA)的增加给临床治疗带来很大困难。研究我国动物源金黄色葡萄球菌的耐药性现状及通过表型分型和基因分型了解菌株的分布情况，辨别我国的流行菌株和非流行菌株，同时比较各地区金黄色葡萄球菌菌株之间的相关性，对于兽医临床及公共卫生都有重要意

2、义。本研究从2008年至2010年，收集并分离到我国不同地区的不同动物源(主要是猪源和牛源)金黄色葡萄球菌共124株。分离鉴定过程采用科马嘉显色培养基对样本进行初筛，并用梅里埃API拭条和凝固酶试验确证，同时使用PCR方法扩增／"／UCgene进一步从基因水平鉴定，分离率达到16％。选用13种抗生素，采用微量肉汤稀释法对分离到的菌株进行耐药性分析。结果显示，MRSA检出率为27％，主要分布在猪源菌株；受试菌株对氨苄西林、青霉素和红霉素的耐药率最高，分别为97％、86％和75％，对其余抗生素的耐药率在50％．O％之间，未发现万古霉素耐药菌株。选择头孢西丁耐药菌株，对其进行甲氧西林耐药基因m

3、ecA的扩增，结果表明mecA基因的携带与头孢西丁耐药表型的完全相符。用商品化的凝固酶分型血清对分离菌株进行凝固酶分型研究。分型结果显示，实验室分离株的优势血清型为凝固酶VII型，Ⅵ型和复合型，没有III型和V型，分型率达到91％，牛源菌株和猪源菌株的流行血清型存在较大差异。我国动物源金黄色葡萄球菌凝固酶血清型别多样，分布相对集中，具有独特的流行特征。结合凝固酶表型分型，扩增凝固酶基因，对基因序列进行比对分析，共扩增出400．1，000bp大小不同的凝固酶基因片段，共6种，构建了36株菌株凝固酶基因的系统进化树。进化树体现了凝固酶基因的多样性，基于该基因的分型方法的分辨力比表型分型高。扬

4、州大学硕士学位论文采用核糖体基因分型(ribotyping)矛H多位点序列分型(ME验中不同血清型及不同耐药谱的金黄色葡萄球菌分离株进行了基因分型研究。核糖体分型结果显示，牛源菌株和猪源菌株在聚类图谱上有着不同的进化方向；不同凝固酶型的菌株在各种杜邦型别之间均有分布，同一凝固酶血清型的菌株基因相似度从50％至100％不等；同一地区(养殖场)的分离株基因相似度较高。MLST分型结果表明，ST9为我国动物源金黄色葡萄球菌的优势序列型，MRSA分离株均为ST9型，MSSA菌株中出现ST9、ST398、ST97等9种ST型。关键词：金黄色葡萄球菌；耐药性；凝固酶分型；核糖体基因分型；多位点序列分

5、型刘洋：我国动物源金黄色葡萄球菌的耐药性和分型研究Antibiotic．resistanceandTypingof⋯StaphyloccocusaureusIsolatedfromAnimalsinChinaM．S．Candidate：YangLiuAdvisors：Prof．Xin’anJiaoProf．LiSongAbstract3一StaphyloccocusaureusisakindofGram-positiveCOCCUSanduniversallydistributedinnature．Itcaninfecthumanandanimalsandisakindofimporta

6、ntzoonosispathogen．PublichealthandfoodsafetyareheavilythreatenedbecauseofitsenterotoxinwhichcancontaminatefoodandleadstofoodpoisoningofhumanThenumberofantibiotic-resistantstrains，especiallymethicillin-resistantStaph)7loccocusaureus(MRSA)strains，havebeeingincreasedrecently，whichmakeclinicaltreatme

7、ntmoredifficult．Tostudyantibiotic-resistanceofStaphyloccocusaureusstrainsofanimalorigin，wemustknowthedistributionofphenotypingandgenotypingofStaph)’loccocusaureusandfurtherdiscriminateprevalentstrainsandnon-prevalenton