小脑间位核调节免疫功能的作用途径研究

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3、脑谷氨酸能神经投射传递小脑的免疫调节信息目的：我们实验室以往的研究表明小脑间位核可调节免疫功能。由于小脑与免疫系统之间没有直接的结构上的联系，因此阐明小脑调节免疫功能的信息传递途径对于更好地理解小脑的免疫调节功能具有重要作用。本研究以小脑一下丘脑的神经投射为切入点来揭示其在传递小脑免疫调节信息中的作用，为小脑神经免疫调节提供新的资料，有助于拓宽小脑功能的知识，促进临床上对小脑神经免疫调节异常疾病的思考和研究。方法：1．在一侧小脑间位核内微量注射顺行神经束路追踪剂葡聚糖一德克萨斯红(dextran-texasred，

4、dextran-TR)，观察小脑间位核至下丘脑神经投射的路径及终止部位。2．在一侧下丘脑外侧区(顺行追踪显示下丘脑内终止纤维最丰富的区域)微量注射逆行神经束路追踪剂红色荧光金(fluoro-ruby,FR)，观察小脑间位核内FR逆行标记的神经元，同时，结合谷氨酸荧光免疫组织化学法探讨小脑问位核投射至下丘脑的神经元中是否存在谷氨酸能神经元。3．在双侧小脑间位核内微量注射谷氨酰胺酶抑制剂6-重氮-5．氧代也-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine，DON)，以抑制间位核内谷氨酸能神经元合成谷氨酸

5、，并以双侧小脑间位核内注射等量生理盐水及未经任何处理的动物作为对照。在上述三组(未处理对照组、生理盐水对照组、DON组)大鼠的单侧下丘脑外侧区微量注射逆行神经束路追踪剂FR，5天后，在双侧小脑间位核内注射DON或生理盐水，3天后，同一层面的问位核脑片应用谷氨酸荧光免疫组织化学技术，观察小脑间位核一下丘脑外侧区谷氨酸能神经投射的数量变化。中文摘要小脑间位核调节免疫功能的作用途径研究4．在双侧小脑问位核内注射DON后第3天，用高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPL

6、C)测定下丘脑内谷氨酸含量的变化。5．在双侧小脑间位核内注射DON后第3天，用血细胞计数法检测动物外周血白细胞中淋巴细胞百分比的变化；用羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylester,CFSE)和结合PE的抗大鼠CD3抗体双标肠系膜淋巴结细胞，流式细胞仪检测T淋巴细胞对刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)刺激的增殖能力的变化；用酶联免疫吸附测定法(enzyme--linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测血

7、清中抗绵羊红细胞IgM抗体水平的变化。结果：1．小脑间位核内微量注射dextran-TR后示踪可见间位核神经元发出离核纤维，行走于同侧小脑上脚中，经小脑上脚交叉到达对侧，然后继续走行于小脑上脚中，进入下丘脑后较多纤维终止于下丘脑外侧区，少数纤维终止于下丘脑室旁核和下丘脑后区。说明小脑间位核神经元发出纤维直接投射至下丘脑(主要是外侧区)。2．下丘脑外侧区内微量注射FR后可逆行追踪到对侧小脑问位核具有FR标记的神经元，这进一步证明了小脑间位核与下丘脑之间存在直接的神经投射；利用谷氨酸荧光免疫组织化学法染色小脑间位核，发

8、现这些FR标记的神经元中有许多谷氨酸阳性神经元。表明小脑间位核投射至下丘脑外侧区的神经纤维中有谷氨酸能神经。3．双侧小脑间位核内注射DON(50mM)后第3天，间位核内FR和谷氨酸双标神经元的数目明显少于生理盐水对照组和未处理对照组，而两组对照之间无明显差异，说明小脑间位核DON注射减少了小脑间位核一下丘脑外侧区的谷氨酸能神经投射。4．双侧小脑间位核内注射D