叶绿素铜钠调节免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠骨髓间充质干细胞的研究

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1、同等学力申请硕士学位硕士学位论文论文题目：叶绿素铜钠调节免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠骨髓间充质干细胞的研究作者姓名：任莉指导教师：高瑞兰学科专业：中西医结合临床所在学院：第一临床医学院提交日期2012年5月万方数据目录中文摘要……………………………………………………………………………………ⅠABSTRACT…………………………………………………………………………………Ⅲ一、前言…………………………………………………………………………………1二、实验研究………………………………………………………………………………2(一)实验材料与方法………………………………………………………

2、………………21．实验动物………………………………………………………………………………22．实验药品………………………………………………………………………………23．实验器材………………………………………………………………………………24．实验试剂………………………………………………………………………………25．实验方法………………………………………………………………………………36.统计方法………………………………………………………………………………7二、结果……………………………………………………………………………………8(一)外周血常规检测………………………………………

3、………………………………8(二)叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠的骨髓造血组织的影响………8(三)骨髓MSC的成骨作用的形态学特征…………………………………………………8(四)流式细胞术检测骨髓MSC……………………………………………………………9(五)PHA刺激的MSC对T淋巴细胞抑制试验……………………………………………10(六)酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠骨髓MSC分泌的TGF-β1的浓度…11三、分析与讨论…………………………………………………………………………12(一)免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型的建立…………………………………………13(二)

4、叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓MSC向成骨细胞分化能力的检测测……………………………………………………………………………………………14(三)免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓MSC培养、鉴定………………………………14(四)叶绿素铜钠对再生障碍性贫血小鼠骨髓MSCT淋巴细胞的调节作用的研究…152万方数据(五)ELISA方法检测小鼠骨髓MSC分泌的TGF-β1的浓度………………………15四、小结……………………………………………………………………………………17五、参考文献………………………………………………………………………………18六、附图……………………………

5、………………………………………………………21致谢………………………………………………………………………………………30文献综述…………………………………………………………………………………31万方数据中文摘要叶绿素铜钠调节免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓间充质干细胞的研究目的通过观察叶绿素铜钠（SCC）诱导免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSC）向成骨细胞分化；对T淋巴细胞的免疫调节；以及对MSC分泌TGF-β1的作用，探讨SCC对再障小鼠MSC的调节作用及其机理。方法①制备免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型，随机分为6组：正

6、常对照、再障模型、SCC低剂量、SCC中剂量、SCC高剂量、环孢菌素阳性对照组。治疗15d，观察各组外周血常规、骨髓病理切片。②取治疗后各组小鼠的骨髓培养MSC，培养到3代后，诱导MSC向成骨细胞分化，观察原代及第1、2代MSC及成骨细胞的形态，并计数成骨细胞的钙结节变化。③流式细胞术鉴定各组MSC，并检测PHA刺激的MSC对T+++淋巴细胞CD4CD25FOXP3T细胞的调节。④酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组MSC分泌的TGF-β1的浓度。结果①SCC中剂量组小鼠的外周血白细胞数明显高于再障模型组（P＜0.05）；SCC低、中和高三个剂量组及环孢菌素阳性对照组小鼠的

7、外周血红蛋白均明显高于再障模型组（P均＜0.01）；以上四个治疗组的外周血小板数也明显高于再障模型组（P＜0.001）。同时，四个治疗组的骨髓增生状况均较再障模型组活跃，其中SCC中、高剂量组的骨髓增生均较环孢菌素阳性对照组活跃。②第2代MSC细胞比原代与第1代MSC胞体突起更长而饱满。第3代MSC诱导后，各组均可以见到成骨细胞，再障模型组钙结节计数明显少于其余5组，SCC低、中及高剂量组的钙结节计数均显著性高于模型对照组（P均＜0.001），其中以SCC中剂量组的钙结节计数最多。③再障小鼠的MSC表+