豚鼠实验性近视眼巩膜成纤维细胞的力学特性变化及其与色素上皮细胞和部分细胞因子关系的研究

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1、河北医科大学博士学位论文豚鼠实验性近视眼巩膜成纤维细胞的力学特性变化及其与色素上皮细胞和部分细胞因子关系的研究姓名：陈博宇申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：马景学201204中文摘要豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞的力学特性变化及其与色素上皮细胞和部分细胞因子关系的研究摘要目的：建立豚鼠镜片诱导型近视眼模型(Lensinducedmyopia，LIM)，观察前部及后极部视网膜色素上皮(Retinalpigmentepithelialcells，RPE)细胞及巩膜成纤维(Scleralfibroblasts，SF)细胞的生长周期变化，观察RPE细胞和SF细胞内基质金属蛋白

2、酶(matrixmetallopeptidase2，MMP一2)、转化生长因子．132(transforminggrowthfactor-beta2，TGF—p2)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)的表达变化；观察外源性转化生长因子(TGF．132)对豚鼠眼球前部及后极部SF细胞生长周期的影响，观察TGF．132对豚鼠眼球前部及后极部SF细胞基质金属蛋白酶(MMP．2)、转化生长因子一B2受体(TransformingGrowthFactor-[3receptortype2，T13RII)和碱性成纤维细胞生长因子(bFG

3、F)表达的影响：结合TGF．p2对细胞力学特性的影响，观察SF细胞的力学特性变化。方法：取出生后2周龄的豚鼠30只(60只眼)雌雄不限，分为A、B、C三组，每组10只，随机选取一只眼为实验眼(LIM眼)，对侧眼为自身对照眼(Self-control，SC眼)。实验眼采用离焦点方法，用．10．00D凹透镜诱导成近视眼模型I¨。A、B、C三组试验眼．10．00D凹透镜诱导时间分别为6天、15天、30天。实验前后检测每组豚鼠双眼屈光状态，用A超测双眼眼轴长度。另取5只(10眼)豚鼠不作任何干预，作为正常对照眼(Norma．contro，NC组)。细胞酶消化法原代培养豚鼠眼球前部及后极

4、部RPE细胞，并传2代。免疫细胞化学法鉴定培养的细胞，利用免疫细胞化学法、荧光定量PCR(Q。PCR)法和WesternBlot法对每组实验眼和对照眼前部及后极部RPE细胞的TGF．p2、bFGF的表达进行半定量及定量检测；用流式细胞仪检测每组实验眼和对照眼前部及后极部RPE细胞的生长周期。结果用SPSS13．0统计软件进行统计分析。组织块培养法培养豚鼠眼球前部及后极部SF细胞，并传2代。免疫中文摘要细胞化学法鉴定培养的细胞，免疫细胞化学法、荧光定量PCR(Q．PCR)法和WesternBlot法对每组实验眼和对照眼前部及后极部SF细胞MMP．2、TGF．132、bFGF的表达

5、进行半定量及定量检测；用流式细胞仪检测每组实验眼和对照眼前部及后极部SF细胞的生长周期；利用细胞微管吸吮的方法测定每组实验眼和对照眼前部及后极部SF细胞的力学特性。结果用SPSSl3．0统计软件进行统计分析。用组织块培养法培养豚鼠后极部SF细胞并传2代，免疫细胞化学法鉴定培养的细胞。将不同质量浓度的TGF．132(分别为0、1、10、100ng／m1)加入无血清DMEM中作用24h，利用免疫细胞化学法、荧光定量PCR(Q．PCR)法和WesternBlot法对每组实验眼和对照眼后极部SF细胞MMP．2、T13RII、bFGF的表达进行半定量及定量检测；用流式细胞仪检测每组后极部

6、SF细胞的生长周期；用细胞微管吸吮的方法测定各组实验眼和对照眼SF细胞的力学特性。结果用SPSS13．0统计软件进行统计分析。结果：lRPE细胞和SF细胞中TGF．132、bFGF、MMP．2的表达：免疫细胞化学、荧光定量PCR(Q—PCR)及WestemBlot法结果显示：①A、B、C三组实验眼和对照眼前部及后极部RPE、SF细胞均有TGF一132的表达，三组实验眼前部及后极部与自身对照眼相应前部及后极部比较，实验眼中TGF．132的阳性率高于自身对照眼(尸

7、始增高，至15天阳性率最高，以后保持较高的阳性率(JPD05)。②A、B、C三组实验眼和对照眼前部及后极部RPE细胞、SF细胞均有bFGF的表达，实验眼前部及后极部与自身对照眼相应前部及后极部比较，实验眼中bFGF的阳性率低于自身对照眼，差异有显著统计学意义(尸