纳米活性炭吸附多烯紫杉醇对小鼠lewis肺癌的药效研究

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1、郑州大学硕士学位论文纳米活性炭吸附多烯紫杉醇对小鼠Lewis肺癌的药效研究姓名：蔡要欣申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：张莉蓉；张英鸽201204摘要纳米活性炭吸附多烯紫杉醇对小鼠Lewis肺癌的药效研究研究生蔡要欣导师张莉蓉教授张英鸽教授郑州大学基础医学院药理教研室河南郑州450052背景和目的：肺癌是一种严重影响人类生命健康的疾病之一，目前已成为世上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。当今抗肿瘤药物治疗仍然存在严重的挑战，主要是无特异性、毒副作用大和耐药性。用纳米粒子作为抗肿瘤药载体可克服肿瘤治疗传统方法中的许多缺陷和不足，通过将化疗药物及其载体纳米化，达到缓释、控释

2、和靶向的目的，提高治疗部位的药物浓度，减少用药量，减轻或避免全身毒副作用。本实验是用纳米活性炭粒子(activatedcarbonnano．particles，ACNP)吸附多烯紫杉醇(docctaxd，DOC)制成一种缓释药物递送系统，并研究其对小鼠Lewis肺癌的疗效。材料与方法：通过用球磨悬浮沉淀法制备DOC的靶向载体ACNP；通过原子力显微镜和透射电镜对其粒径和形态进行表征；将一定比例的ACNP与DOC混匀超声吸附，测不同时间点被ACNP吸附DOC的量，以吸附曲线达最高不再上升点所对应的时问作为吸附达平衡时间；将不同比例的ACNP和DOC混悬液大吸附平衡后，测被A

3、CNP吸附DOC的量，用等温吸附公式求得ACNP与DOC达吸附平衡后的最佳配比。体外用恒温摇床、透析装置和溶解液模拟体内环境对摘要ACNP吸附DOC达平衡(以下简称为ACNP．DOC)后的释药特性进行分析研究。以甲基噻唑蓝(MTT)法研究ACNP．DOC药物体外培养Lewis肺癌细胞株的抑制作用：实验设control组、浓度分别为O．16、0．8、4、20和100pg／ml药物实验组和相同浓度梯度的DOC药物组溶液(ACNP．DOC组剂量按含DOC的量计)。用流式细胞仪测定ACNP—DOC药物对体外培养Lewis肺癌细胞凋亡抑制和生长抑制作用；实验设control组、AC

4、NP(0．39p,g／m1)组、DOC药物(0．79ttg／m1)组和ACNP—DOC药物(0．79ttg／m1)组(ACNP—DOC组剂量按含DOC的量计)。体内动物模型试验，构建能够稳定表达含荧光素酶的LLC(Lewislungcell，LLC)．Luc细胞株，并用C57BL／6小鼠构建胸腔肺癌模型；实验研究ACNP．DOC药物对C57BL／6小鼠Lewis胸腔肺癌模型生命的影响；采用IVIS活体成像系统研究ACNP．DOC药物对活生物体自发光肿瘤模型的肿瘤生长抑制作用，考察ACNP-DOC药物与DOC相比其体内抗肿瘤作用是否有显著差异；实验分组，小动物活体成像实验设

5、control组、20mg／kgDOC药物组、ACNP对照组、10mg／kgACNP．DOC药物组、20mg／kgACNP—DOC药物组和30mg／kgACNP—DOC药物组(ACNP．DOC组剂量按含DOC的量计)。用透射电镜观察药物与细胞的微细结构关系，初步探讨ACNP．DOC对Lewis肺癌的作用机制。结果：采用球磨悬浮沉淀法制备的ACNP形状规则、颗粒大小均匀、表面光滑、近似球状，平均粒径为60士lOnm；紫外可见分光光度计200"--300nm波长扫描结果显示，DOC在207nm和230nm处有最大吸收，且在230nm处吸收最为稳定，所以实验中选择230nm为D

6、OC的测定波长。在l'--8mg／L的浓度范围内，DOC的吸光度D与其浓度C呈直线正相关，线性回归方程为D=o．00412+0．06429C(r=0．99952，P<0．0001)。在20℃时，25min左右ACNP吸附DOC达到吸附平衡状态，并且随着时间的延长吸附量无明显变化；室温条件下，所得吸附等温方程式为C／X=．0．00405+0．00511C(r=a劝9J，P<0．0001)，ACNP对DOC的饱和吸附量Xm=195．69mg／g，IgACNP吸附195．69mgDOC达到饱和。所以配制纳米药物时ACNP与DOC质量比为5：1。纳米药物体外释放实验结果显示，纳米

7、药物释放30d累积释放量为76．18％，缓释效果明显。体外细胞实验，ACNP．DOC药物组与单纯使用DOC组对Lewis肺癌细胞抑瘤率相比，抑瘤作用明显，实验结果具有统计学意义，各组之间的统计结果P值均Ⅱ摘要维持在0．Ol以下，而ACNP组与溶解液对照组相比抑瘤率均没有显著性差异；ACNP．DOC药物组与control组、单纯ACNP组对Lewis肺癌细胞凋亡率相比尸<0．01、与单纯DOC药物组相比尸<0．05，n=3。体内动物实验，(1)C57BId6小鼠Lewis胸腔肺癌模型的生命延长率实验中，与control组相比，2