拟南芥多聚adp-核糖化修饰蛋白的富集和鉴定

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1、拟南芥多聚ADP-核糖化修饰蛋白的富集和鉴定王文静吴巧葛晓春复旦大学遗传工程国家重点实验室复旦大学生命科学学院摘要：多聚ADP-核糖化修饰［poly(ADP-ribosyl)ation,PARylation］是一种可逆的蛋白质翻译后修饰，该修饰由多聚ADP-核糖聚合酶［poly(ADP-ribose)polymerase,PARP］催化.多聚ADP-核糖化修饰蛋白主要在动物中发现，在植物屮少有报道•微生物来源的蛋白质AF1521具有一个能结合多聚ADP-核糖［poly(ADP-ribose),PAR］的macro结构域(macrodomain),其突变蛋白AF15

2、21-G42E失去了结合PAR的活性•我们利用AF1521蛋白对PAR的亲和作用来富集拟南芥中的PARylation蛋白质底物并进行质谱分析，同时用AF1521-G42E作为富集过程的负对照•通过这种方法，我们得到多个ADP-核糖化修饰相关蛋口，并对其屮一个蛋口GRP7进行了验证.关键词：AF1521;拟南芥;AF1521-G42E;多聚ADP-核糖化;作者简介：王文静(1990—),女，硕士研究生；作者简介：葛晓春，女，教授，通信联系人，E-mail:xcge@fudan.edu.cn.收稿日期：2017-02-06基金:国家自然科学基金(31170169,31

3、070232)Identificationofpoly(ADP-ribosyl)atedProteinsinArabidopsisWANGWenjingWUQiaoGEXiaochunSchoolofLifeSciences,FudanUniversity;Abstract：poly(ADP-ribosyl)ationisatypeofreversibleposttranslationeilmodificationcatalyzcdbyenzymesknownaspoly(ADP-ribose)polymerases(PARP).Theproteinsubstra

4、tesaremostlyfoundinanimalsandtherearerarereportsinplantssofar.AF1521proteinoriginatedfrommicroorganismpossessesamacrodomain,whichcanrecognizeandinteractseiectivelywiththetenninalresidueofpoly(ADP-ribose)(PAR)、whereasthemutantprotoinAF1521-G42EloscsthePAR-bindingactivity.Inourstudy,weu

5、sedAF1521asaselectivebaitforenrichingpoly(ADP-ribosyl)atedproteinsubstratesorproteinsthatinteractwiththeminArabidopsis.Inthemeantime,AF1521-G42Ewasusedasacontroloftheexperiment•LC-MS/MSwasusedtoanalyzethepul1-downproteins.Inthisway,weidentifiedacoupleofpossibleprotoinsubstreitcsofpoly

6、(ADP-ribosyl)ationorproteinsthatrelatedwithpoly(ADP-ribosyl)atedproteins,andoneproteinofthem,GRP7,wasverifiedbyinvitropulldownassay.Keyword：AF1521;Arabidopsis;AF1521-G42E;poly(ADP-ribosyl)ation;Received：2017-02-06多聚ADP-核糖化是一种重要的蛋白质翻译后修饰，它调节细胞内的一系列生理牛化过程，如D7A修复［1-2］、转录调控固、染色质重塑赵1、细胞死亡臣

7、1、细胞周期进行回、RNA剪切口1、胞内运输宜、蛋H质降解回等•在植物中，多聚ADP-核糖化修饰则与多种生物与非生物胁迫应答过程有关，例如抗病反应、干旱、高温、强光、氧化等非生物胁迫反应［10-11］・PAR修饰由多聚ADP-核糖聚合酶PARP催化［12］・PARP与断裂DNA结合后被激活,催化烟酰胺腺卩票吟二核昔酸(NicotinamideAdenineDinucleotide,NAD)中带负电荷的ADP-核糖基团转移到靶蛋白上，PARP的反复催化使得靶蛋白上形成直链或带有支链的多聚ADP-核糖分子，靶蛋白电化学性质发生巨大改变［12-13］・靶蛋口上的PAR能

8、够被多聚A