内源性大麻素系统在人脑胶质瘤发展过程中表达差异的研究

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1、厦门大学硕士学位论文内源性大麻素系统在人脑胶质瘤发展过程中表达差异的研究姓名：韩丽君申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：傅瑾2012摘要目的：研究内源性大麻素系统，包括内源性大麻素(AEA和2．AG)、内源性大麻素受体(CBl和CB2受体)、及内源性大麻素代谢酶(NAPE．PLD、DGL、FAAH、MGL)在低级别、高级别人脑胶质瘤及胶质瘤瘤周组织中的含量变化，为脑胶质瘤的诊断及治疗提供新的参考指标及靶点。方法：本研究收集了32例胶质瘤肿瘤临床样本和2l例胶质瘤瘤周临床样本。采用LC／MS检测内源性大麻素在低级

2、别、高级别人脑胶质瘤及胶质瘤瘤周组织中的含量；采用RT-PCR(RealTime．PCR)方法检测内源性大麻素水解酶在低级别、高级别脑胶质瘤及胶质瘤瘤周组织中的的基因表达，并用LC／MS检测其中内源性大麻素水解酶的水解活性；采用RT_PCR(RealTime．PCR)方法、westemblot方法、免疫组化方法及免疫荧光的方法检测内源性大麻素受体在低级别、高级别脑胶质瘤及胶质瘤瘤周组织中的的基因及蛋白表达。结果：用LC／MS方法检测到在内源性大麻素AEA在肿瘤组织中比瘤周组织有明显降低，而2-AG在肿瘤组织中比瘤周

3、组织有明显升高。相比瘤周组织，胶质瘤组织中的内源性大麻素代谢酶NAPE．PLD、FAAH、MGL的基因表达及酶活性均为降低，而DGL的基因表达没有变化。CBl和CB2受体在人脑胶质瘤组织中表达比瘤周组织均有明显的升高。结论：内源性大麻素系统在脑胶质瘤发生发展过程中的变化，包括AEA水平的降低、2．AG水平的升高、内源性大麻素代谢酶的mRNA及酶活性水平的降低及内源性大麻素受体表达的升高，为胶质瘤的诊断及治疗提供新的理论依据和靶点。关键词：大麻素受体；内源性大麻素；胶质瘤AbstractObjec伽e：T0inVes

4、tigatethealterationofendocannabinoidsystemincludingendocannabinoids，endocannabinoidreceptersandmetabolicenzymeofendoc锄-nabinoids，inh啪an鲥omas锄dnomalbraintissuesandsupplypotentialendogenousbiomarkersforglial劬nor．Method：Inthepresentstudy，weinVestigatedmeleVelsof饥

5、romajorendocan-nabinoids，anandamideand2一arachidonylglycerol(2一AG)byLC／MS，andtheirrecel'tors，CBlandCB2，inhuIIlan10wgradeglioma(WHOgradeI-lI)tissues，h讪gradeglioma(WHO伊adeIIIIⅥtissues，锄dnon—nlmorbrailltissuecontrolsbyRT-PCRandwestemblot．W

6、ealsomeasllredtheeXpress

7、ionsandactiVitiesoftheefu可mesresponsibleforanandamide锄d2-AGbiosynthesisanddegradation，thatis，N—aCylphosphatidylethan01amine-hydrolysingphospholipaseD(NAPE-PLD)，fatt)racidamidehydrolase(FAAH)，monoacylglycerollipase(MGL)，anddiacylglycerollipase-alpha(DGL)，inthes

8、amesa埘IplesbyRT-PCRandLC／MS．Resuh：Li(1uidchromatography砌assspectome仃yanalysisshowedthatthelevelsofanandamidedecreased，whereastheleVelsof2-AGincreasedingliolllatissues，comparingto也enon—mmorconn．01s．TheexpressionleVelsandactiVitiesofNAPE-PLD，FAAHandMGLalsodecrea

9、sedingliomatissues．ThemRNAleVelofDGLunch锄gedincon哟ltissues锄dgliomas．Fllrthennore，quantitatiVe—PCRallalysis孤dwestem-blotanalysisrevealed也attheeXpressionleVelsofcananbinoidreceptors，