桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞抑制作用体外探究

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1、桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞抑制作用体外探究【摘要】目的：体外研究中药桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。方法：以3种人口腔鳞状细胞癌细胞株为研究对象，采用喙哩蓝（MTT）比色法观察桂皮醛不同质量浓度、不同作用时间下对各细胞株增殖的影响。应用SPSS16.0软件对数据进行方差分析。结果：与空白对照组相比，256、128、64、32mg・L-1质量浓度组的桂皮醛对人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖表现出明显抑制作用，且抑制作用随着药物质量浓度的升高而加强，呈现明显的剂量-效应关系。药物作用时间24h时，作用质量浓度16mg・L-1时，对人舌鳞状细胞癌Tca81

2、13细胞株抑瘤率达到5&33%；作用质量浓度为32mg・L-1时对KB细胞及人颊黏膜鳞状细胞癌BCaCD885细胞株的抑制率分别为66.08%、76.61%,其抑制率随着药物作用时间的延长而增加。结论：桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用与质量浓度和作用时间有关，中、高浓度的桂皮醛对3种人口腔鳞状细胞癌细胞增殖均具有明显的抑制作用，在一定程度上肯定了桂皮醛的抗肿瘤作用。【关键词】桂皮醛；口腔鳞状细胞癌细胞；囈哇蓝【中图分类号】R739.8【文献标志码】A桂皮醛别名为肉桂醛，具有抗炎、抗菌、诱导肿瘤细胞凋亡等多种作用。目前有关桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞

3、影响的报道较少。本研究旨在探讨桂皮醛对人口腔鳞状细胞癌细胞株生长的影响，以期能进一步验证桂皮醛的抗肿瘤活性。1材料和方法1.1主要试验材料桂皮醛（中国医药上海化学试剂公司），批号为F030516；KB细胞株、人舌鳞状细胞Tca8113细胞株、人颊黏膜鳞状细细胞癌BCaCD885细胞株（口腔疾病研究国家重点实验室，四川大学）；RPMI1640培养液（Gibco公司，美国）；小牛血清（成都哈里生物公司）；嗟13坐蓝（methylthiazolylte-trazolium,MTT）,每支250mg（Sigma公司，美国）；二甲基亚矶（上海药品制剂公司）；倒置相

4、差显微镜及照相系统（Nikon公司，日本）；血细胞计数板（浙江求精医药公司）。1.2方法1.2.1细胞培养液的配制取100mL小牛血清转移至约900mLRPMI1640培养液中混匀，使其成为含10%小牛血清的培养液。按照同样的方法配制含20%小牛血清的培养液。加入碳酸氢钠溶液调节pH值为7.4O然后过滤分装至消毒好的lOOmL盐水瓶中，标记，-20°C保存，备用。1.2.2桂皮醛溶液的配制取桂皮醛原液24.4UL,加入含小牛血清的RPMI1640培养液至lOOmL,混匀，过滤，得到质量浓度为256mg・L-1的药物溶液。再用对倍稀释法稀释成终质量浓度为1

5、28、64、32、16、8mg-L-1的桂皮醛溶液，分装于消毒好的青霉素瓶中，-4£保存，备用。1.2.3MTT法检测采用256、128、64、32、16、8mg•L-16种质量浓度的药物溶液，以24、48、72h为作用时间，用MTT法观察3种口腔鳞状细胞癌上皮细胞的生长变化，与不加药物的空白对照组比较细胞生长率的差异。1)Tca8113细胞株和KB细胞株：取对数生长期的细胞用于实验，用血细胞计数板计数，调整细胞悬液计数为每毫升3X104个，分别接种于96孔板中，每孔200订。置于37°C、5%C02恒温细胞培养箱内孵育，待培养细胞贴壁后，加入含不同质量

6、浓度的桂皮醛培养液，分别继续孵育24、48、72ho每个质量浓度设6个复孔，周边空白孔加磷酸盐(phosphatebufferedsaline,PBS)缓冲液。孵育到规定时间后，轻轻取出一块96孔板，吸出培养液，弃之，PBS缓冲液轻轻洗涤，每孔加入180pL的RPMI1640培养液，再加入20nL的MTT溶液37°C.5%C02继续培养4h后终止培养，吸出孔内培养液，每孔加入150PL-甲基亚枫，置摇床上低速振荡10min,使结晶充分溶解后，在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值。2）BCaCD885细胞株：取处于对数生长期的细胞用于实验，用血细胞

7、计数板计数，调整细胞悬液计数为每毫升1X105个，MTT方法同前。1.2.4细胞生长抑制率计算细胞生长抑制率=（1-试验组平均吸光值/对照组平均吸光值）X100%。细胞生长抑制率230%判定为药敏试验阳性，细胞生长抑制率0.05）o在各个不同作用质量浓度桂皮醛组内，表现为随着作用时间的延长，细胞增殖抑制率有一定程度的增加，在各个作用时间段内，随着桂皮醛质量浓度的增高，细胞生长增殖抑制率出现时间效应关系，但是未见细胞生长变化率随着作用时间延长出现明显的下降趋势（P>0.05）（图1）。2.2.2对KB细胞株生长的抑制作用同一作用时间内，随着药物质量浓度的增

8、加，KB细胞增殖抑制率明显增大。药物质量浓度为256mg-L-1时对细胞增殖抑制