辐射应激对小鼠t淋巴细胞的作用及香菇多糖的干预机制研究

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1、摘要目的：研究香菇多糖对辐射所致小鼠免疫应激损伤的保护作用。从整体水平验证香菇多糖的防护干预作用，并从细胞及分子水平探讨香菇多糖该作用的机制。方法：1．实验模型建立与分组：①辐射损伤模型的建立：辐射条件：全身性辐射，吸收剂量为40cGy／d，吸收剂量率为300cGy／min，皮源距为150cm，照射野为20cm×20cm，连续照射30d。②实验分组：实验小鼠分为五组，分别为：辐射模型组、正常对照组、香菇多糖高剂量组、香菇多糖中剂量组和香菇多糖低剂量组。2．T淋巴细胞提取：应用尼龙毛柱法从小鼠脾脏提取T淋巴细胞。3．N

2、O含量测定：按照试剂盒说明书要求进行操作，测定不同组另tJ4,鼠T淋巴细胞分泌NO含量。4．IL．2含量测定：按照剂盒说明书要求进行操作，测定不同组别小鼠T淋巴细胞分泌IL．2含量。5．RNA提取：按照试剂盒说明书要求，从小鼠T淋巴细胞中提取mRNA。6．RNA逆转录合成cDNA：按照试剂盒说明书要求，从提取出的RNA合成cDNA。7．cDNA扩增：按照试剂盒说明说要求，采用荧光染料嵌合法，配制PCR反应液，进行PCR扩增。结果：在整体水平，与正常组相比，慢性低剂量辐射可导致小鼠体重增加速率下降，脾脏指数和胸腺指数显

3、著下降，脾脏出现明显的病理性改变。与辐射组相比，香菇多糖组可明显改善上述改变。在细胞水平，与正常组相比，慢性低剂量辐射可导致小鼠T淋巴细胞活性降低，IL．2分泌减少，NO含量升高。与辐射组比较，香菇多糖组T淋巴细胞活性明显增加，IL．2分泌增加，NO含量降低，且与正常组比较，无明显差异。在分子水平，与正常组相比，慢性低剂量辐射可引起K+通道Kvl．3、Ca2+通道Orail基因表达出现明显上调。与正常组相比，香菇多糖低剂量组和高剂量组Kvl．3、Orail基因表达无明显差异。与辐射模型组相比，香菇多糖低剂量组Kvl．

4、3基因表达下调、Orail基因表达无显著差异，香菇多糖高剂量组Kvl．3、Orail基因表达均明显下调。结论：慢性低剂量辐射可导致小鼠整体及免疫系统功能改变，影响T淋巴细胞功能，引起T淋巴细胞膜上部分离子通道mRNA的表达改变，而香菇多糖可明显干预辐射所致的上述改变。表明，香菇多糖作为一种免疫调节剂，对辐射所致小鼠免疫系统T淋巴细胞损伤具有明显防护作用，而该作用可能与香菇多糖影响T淋巴细胞膜上的离子通道有一定关系。关键词：香菇多糖；辐射应激；T淋巴细胞；NO；IL一2；离子通道IIABSTRACTObjection：

5、Tostudytheeffectsoflentinan(LTN)onmiceexposedtochronicradiation，especiallyonTlymphocytesinmice．TolookforthemechanismbaseofLentinanonchronicradiationstress．Methods：1．Micewererandomizedintofivegroups(n=10foreachgroup)whichconsistedofmiceexposedtoradiation(Rad)，no

6、rmalcontrolmice(Ctr)，irradiatedmicetreatedwithlentinaninlow(O．002mg／ml，Rad+LLTN)，middle(0．01mg／ml，Rad+MLTN)andhigh(O．02mg／ml，Rad+HLTN)does．Micefromallgroups，exceptcontrolgroup．wereexposedtosystemicradiationofO．4Gy60Coy—raycontinuouslyfromMondaytoFridayforsixwee

7、ks．Micefromdifferenttreatmentgroupswereinjectedwith0．5mloflentinanatconcentrationsmentionedearlier．2．Afterthelastradiation，Tlymphocyteswereextractedfromspleenofmicewithnylonwoolfibercolumnf3．NOlevelsweredeterminedbymeasuringitsstablemetabolite，nitrate，usingaNOa

8、ssaykitaccordingtokitinstruction．4．Afterincubationat37℃，5％C02for24h，IL-2levelsintheTlymphocytesweredetectedbyanElisakitaccordingtotheinstructionprovided．5．AfterculturingtheT