大肠埃希菌药敏结果和产超广谱β-内酰胺酶菌株的耐药基因分析

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1、大肠埃希菌药敏结果和产超广谱B■内酰胺酶菌株的耐药基因分析朱俊民1周明莉2(1河南省潔河市中心医院检验科462000;2河南省郑州铁路疾病预防和控制屮心450052)【中图分类号】R378.2【文献标识码】A【文章编号］1672-5085(2012)16-0089-03【摘要】目的对我院2011年上半年分离出的147株大肠埃希氏菌药敏及耐药基因型进行分析，为临床合理应用抗生素，减少耐药菌株的出现提供参考依据。【方法】采用梅里埃公司的VITEK2全自动微生物分析仪，对标本进行细菌鉴定和药敏分析。对产生超广谱&b

2、eta;—内酰胺酶(Extended・spectrumβ-lactamase,ESBLs)的大肠埃希菌确证实验，采用美国临床检验室标准化委员会(ClinicalandLaboratoryStandardslnstitude,CLSI)推荐的纸片扩散法，进行确证实验。耐药基因采用多重PCR检测鉴定。【结果】147株大肠埃希氏菌，ESBLs菌株有71株，百分比为48.1%O对71株ESBLs大肠埃希氏菌的质粒进行PCR扩增，显示29株CTX-M基因阳性，检出率为40.8%；TEM基因型菌株25株，所占百

3、分比35.2%；SHV基因型菌株17株，所占百分比23.9%型；OXA基因型菌株11株，所占百分比15.4%。【结论】本地临床分离大肠埃希菌对抗生素敏感性，存在有一定的地域差别，这可能跟不同地区用药习惯用药历史有关。本地区ESBLs大肠埃希菌具有较高的CTX-M型ESBLs检出率。是本地区产ESBLs大肠埃希菌流行的的主要耐药基因型。【关键词】大肠埃希菌超广谱b•内酰胺酶基因型CTX-M细菌耐药性大肠埃希菌是院内感染监测的主要病原菌。由于抗生素在各地区各个方面的广泛应用，导致大肠埃希氏菌对多种抗生素产生耐药。

4、在这些耐药的大肠埃希氏菌屮，产生超广谱的β—内酰胺酶类的菌株呈递年增长。而超广谱β-内酰胺酶是导致肠杆菌科细菌对第三代头抱菌素耐药的最常见机制，由于其耐药基因的多样性和传导性，使得医院感染的细菌的耐药性越来越复杂，越來越严重。而且，耐药基因也在各地区存在差异。现对本院20□年上半年临床分离的大肠埃希菌，耐药性和ESBLs耐药基因型进行检测和分析，了解大肠埃希氏菌的耐药性和本地区ESBLs耐药基因的分型。材料和方法1•标本来源汇总2011年上半年潔河市中心医院微生物室分离出的147株大肠埃希

5、氏菌。2•仪器和试剂2.1主要仪器法国梅里埃公司的VITEK2全自动微生物分析仪。法国梅里埃公司BactAlert3D120全自动血培养仪。PCR扩增仪(PC708型，北京诺士科贸有限公司)。2.2主要试剂血培养瓶是梅里埃公司的配套培养瓶，M・H琼脂、血平板由郑州安图公司提供。药敏纸片：苯畔西林(OXJOmg)、阿莫西林/棒酸(AMC,20/10mg)＞氨曲南(ATM,30mg)^头泡噬厉(CTX,30mg)、头泡他噪(CA乙30mg)、头抱噬月亏/克拉维酸(CTX/CLA,20/10mg)＞头孑包曲松(C

6、RO,30mg)＞头抱畔咻(C乙30吨)等，由北京天坛药物生物技术开发公司提供。PCR试剂盒和基因检测的相关试剂由郑州华美生物工程公司提供。质控菌株：人肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603o3.药敏检测的方法3.1血液标本采用法国梅里埃公司BactAlert3D120全自动血培养仪培养。细菌鉴定和药敏分析采用法国梅里埃公司的VITEK2全自动微生物分析仪，对标本进行细菌鉴定和药敏分析。结果如下表一。3.2对产生超广谱β—内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌确证实验,采用Kir

7、by-Bauer纸片扩散法，并严格按照美国临床检验室标准化委员会(CLSI)制定的标准进行。按照CLSI规定：头卿塞月亏(CTX)30µg/片和头抱噬月亏加克拉维酸(CTX-CA)30µg/片，头泡他唳(CAZ)30µg/片和头孑包他噪加克拉维酸(CAZ-CA)30µg/片，2组中任何一•组含克拉维酸的抑菌环直径比不含克拉维酸的纸片抑菌环直径大于或等于5毫米，即可判定为超广谱β—内酰胺酶(ESBLs)阳性。147株大肠埃希氏菌经检测，有71株ESBLs

8、阳性的菌株。阳性率为48.1%。4•基因检测的方法4.1质粒提取将分离的71株产ESBLs大肠埃希菌分别接种于5.0mlLB培养液中，加入氨茉青霉素至50〜100μg/ml,37°C恒温振荡培养7h。采用质粒提取试剂盒提取质粒DNA,保存于・20°C备用。4.2基因检测均为聚合酶链法，各种靶基因扩增反应体系如下，以50.0μl体积计算，各成份分别为：试剂加入量(μl)终浓度正反向引