egf通过上调trpm7促进肿瘤细胞迁移的作用和机制研究

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1、河北医科大学博士学位论文EGF通过上调TRPM7促进肿瘤细胞迁移的作用和机制研究姓名：杲海霞申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：张海林201204中文摘要磁刺激对小鼠原代海马神经元突触形态、突触蛋白及BDNF．TrkB信号通路表达的影响摘要可塑性是中枢神经系统(CNS)最突出的特点之一，不仅参与调解神经发育及再生，而且在增强突触功能与促进神经环路重建等方面也起到重要的作用。突触可塑性是学习和记忆的分子机制，突触可塑性是指那些因突触活力改变而引起神经递质释放发生变化的生理过程，普遍认为是突触的结构或者功能发生了变化，

2、又称为突触结构可塑性及突触功能可塑性。对突触进行不同强度和不同频率的外界刺激可以引起突触兴奋性的改变，根据突触功能可塑性变化的性质不同，它可分为长时程增强(10ngtermpotentiation，LTP)和长时程抑带IJ(10ngtermdepression，LXO)。通过选择性地修饰位于活性区域的突触，使突触连接增强或减弱，从而参与学习和记忆活动。近年来，由于脑刺激在临床上被应用于治疗精神病及神经功能障碍方面，并取得较好的治疗效果，因此脑刺激方法作为一个可能的替代疗法而受到广泛关注。经颅磁刺激(TMS)能够利用导电

3、线圈产生的脉冲磁场来影响被刺激脑区的电活动。这一时变磁场作用于不同脑区产生可传导性的感应电流，改变神经元兴奋状态，可以抑制或易化刺激位点及与其有突触联系的神经细胞的兴奋性，从而影响脑组织深部神经细胞功能活性的一项无创、无痛、非侵入性的脑研究手段。临床上，经颅磁刺激常用于治疗情绪、认知、感觉和运动神经系统等精神疾病患者，而重复经颅磁刺激多用于卒中、抑郁症、癫痫、阿尔茨海默病及帕金森病等疾病的恢复治疗，如书写痉挛，耳鸣和失语等。但经颅磁刺激的生物学机制尚未明确，可能通过诱导长时程增强(LTP)或长时程抑制(LTD)，进而对

4、大脑皮层的兴奋性及突触的连接情况产生持续的影响。而且相关研究认为，可能通过交变磁场触发神经元动作电位、促进神经递质的释放，从而影响突触的结构和功能。通过调节突触功能和结构可塑性，rTMS可能诱发其他神经生理过程，如参与调节基因和蛋白的表达等。另外，施加磁刺激的强度、频率等参数，以及刺激方式都会导致不同的刺激效果。中文摘要突触素(Synaptophysin，SVN)，生长相关蛋白43(growth．associatedprotein43，GAP43)和突触后致密物95(postsynapticdensity95，PSD9

5、5)是三种典型的突触相关蛋白。SYN和GAP43分布在突触前膜，PSD95位于突触后结构中。这些突触特异性蛋白标记物可以直接或间接地反映突触活性、突触形态变化及突触的生物学功能。大量研究表明，突触素在突触形成、突触联系建立及重建过程中具有重要作用；生长相关蛋白在形成新的突触连接过程、神经发育阶段及生长锥形成时期含量增加，而这些事件都伴随着轴突的生长，因此生长相关蛋白也呈现出高表达现象。突触后致密物(postsynapticdensity,PSD)是位于突触活性区突触后膜下方与胞浆相连的一层致密电子结构，积极参与调节神经

6、递质的分泌、积聚及相应受体的生物功能。而且近期关于突触树突棘相关基因研究的报道显示，新树突棘形成所需蛋白也要在突触后致密物中合成。突触后致密物95是突触后致密物复合物中的重要构成物质，通过与NMDA受体亚基的C末端结合调节细胞蛋白表达和酶的活性。相关研究证实，在体外培养条件下，给予人M054细胞持续施加60Hz、5mT的磁刺激并作用12小时，能观察到生长相关蛋白转录水平及蛋白表达均有所增加；而在体实验研究表明6周的低频(O．5Hz)和高频(5HZ)重复经颅磁刺激均能引起大鼠脑内突触素蛋白转录和表达水平上升；并且通过磁刺

7、激治疗可以提高中风后脑梗死区的突触素与生长相关蛋白的表达水平。这些研究证实磁刺激与突触蛋白标记物可能具有相关性，而这些突触相关蛋白可能与神经生长因子之间也存在某种联系。脑源性神经营养因子(BDNF,brain．derivedneurotrophicfactor)与其特异性酪氨酸激酶受体B(TrkB，TyrosinekinasereceptorB)结合后能够引起下游关键激酶的磷酸化，促进BDNF在神经元胞体和树突中的合成，进而激活信号转导通路，也可能BDNF在这些部位合成后被运送到突触前神经元后再发挥其调控功能，这两种可

8、能都可以解释为BDNF的突触前调控机制。除此之外，BDNF还参与调节谷氨酸和GABA能突触的突触后神经递质受体的数量与分布，即突触后调控作用。未成熟的神经系统具有很高的可塑性，BDNF可以通过突触前、后的作用机制调节突触数量、突触功能以及树突形态。研究证实神经元的生理活动能够促进BDNF的转录合成，并将BDNF运送至树突并储存起来