高山离子芥冷诱导基因在甘蔗上的遗传转化研究

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1、广西大学硕士学位论文高山离子芥冷诱导基因在甘蔗上的遗传转化研究姓名：李粲申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：李容柏20120628高山离子芥冷诱导基因在甘蔗上的遗传转化研究摘要甘蔗(SaccharumofficinarumL．)是我国乃至世界最主要的糖料作物。广西是我国最大的甘蔗原料产地，但由于近年来低温天气频频出现，导致甘蔗产量减少，在含糖量降低，造成了巨大的经济损失。甘蔗是无性繁殖作物，具有复杂多倍体、非整倍体、高度杂合等特性，因此使用常规方法进行定向育种十分困难。利用转基因技术对甘蔗进行改良具有高效性，可以加速新品种选育。本研究以高山离子

2、芥冷诱导基因Cbcorl5a为目的基因、Bar基因为筛选标记，构建了含有CaMV35S启动予甘蔗转基因双元植物表达载体pCambia3300一cbcorl5a，通过农杆菌介导法将目的基因Cbcorl5a导入甘蔗愈伤组织。主要研究结果如下：1、不同激素组合影响甘蔗愈伤组织分化。研究结果表明，2．0mg／L的KT和0．2mg／L的NAA的分化培养基分化率最高，分化率达到89％。2、不同激素浓度和蔗糖浓度影响再生苗生根速率。通过调节NAA和蔗糖浓度筛选最佳生根培养基。研究结果表明，使用含有5．0mg／L的NAA和70g／L的蔗糖的培养基最有利于甘蔗生根。3、筛

3、选标记PPT浓度对再生植株影响。研究结果表明，愈伤组织需使用0．75mg／L的PPT筛选，幼苗应使用0．5mg／L的PPT筛选。4、不同抗生素浓度对农杆菌抑制效果。研究结果表明，在基因导入愈伤组织共培养3天后，使用500mg／L的Cef(头孢噻肟钠)进行抑菌，甘蔗分化出幼苗以后，使用300mg／L的Cef进行抑菌生长，幼苗生根以后使用200mg／L的Cef进行抑菌生长。5、阳性转基因甘蔗鉴定，通过农杆菌介导法转化，目前获得了9株抗性植株，经PCR检测，有5株呈阳性。本实验建立了完整的甘蔗转化体系，并成功获得转基因植株。关键词：高山离子芥冷诱导基因；双元表

4、达载体构建；甘蔗；农杆菌介导法；遗传转化IIGENETICTRANSFORMATl0N0FC日0尺厶铲()R4B(五ⅣGE。4人叨COLD—INDUCEDGENESINSUGARCANE(SaccharumofficinarumL．)ABSTRACTIthasknownthatsugarcane(SaccharumofficinarumL．)isoneofthemostimportantsugarcropsinChinaandthroughouttheworld．AndGuangxiprovincehasthelargestnumberofrawmate

5、rialsofsugarcane．However,duetothe丘equenceofcoldstressinrecentyears，ithasleadtolargereductionofsugarcaneproductionandsugarcontent，resultinginhugeeconomiclosses．Assugarcane，oneofthevegetativelypropagatedcrops，isacomplexpolyploid，suchasaneuploid，highlyheterozygous，andothercharacteri

6、stics．Soitisprobablyverydifficulttomanagethecoldstressusingconventionalbreedingstrategies．Whileapplicationoftransgenictechniquecouldacceleratethebreedingofcoldtolerantsugarcanevarieties．Inthisstudy,coldtolerancegeneCbCORl5afromChorisporabungeanawasusedtoconstructthedualexpression

7、vectorpCambia3300一CbCORl5awhichcardedtheselectionmarkerbargeneandCaMV35Spromoter．Then，theconstructedvectorwasappliedtotransformsugarcaneembryoniccallibyAgrobacteriumtumerfaciens．mediatedmethod．Themainresultswerelistedasfollowing：1Theresultsshowthatdifferenthormonecombinationsaffe

8、ctedthedifferentiationofsugarcanecallus，