降钙素对大鼠膝oa模型软骨退变和软骨下骨破骨吸收的影响

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：监茎峭El降钙素对大鼠膝OA模型软骨退变和软骨下骨破骨吸收的影响中文摘要降钙素对大鼠膝OA模型软骨退变和软骨下骨破骨吸收的影响中文摘要目的：改良Hulth法制作大鼠膝骨关节炎模型，评价造模的有效性；在有效的模型中，分析关节

2、软骨和滑膜基质金属蛋白酶的变化特点；研究降钙素(Calcitonin，CT)对膝关节软骨、滑膜及软骨下骨改变的影响，探讨CT对关节软骨的保护作用，以及对软骨下骨骨吸收的抑制作用。方法：105只SD大鼠随机分为对照组(ACLT+MMx)、降钙素(CT)干预组和假手术组(Sham)，每组各35只。(1)改良Hulth法行骨关节炎(OA)造模，对照组(ACLT+MMx)：前交叉韧带横断和内侧半月板切除；Sham组：打开关节腔，不切断交叉韧带和切除半月板；CT组：造模术后第二天始行降钙素15IU／kg隔日皮下注射，对照组和sham组注射等量的生理盐水。在造模1w、2w、4w、

3、6w、8w、12w处死大鼠。膝关节标本肉眼大体观察，取股骨内侧髁软骨，胫骨内侧平台软骨下骨及关节内滑膜作为组织标本，HE染色、甲苯胺蓝染色、Masson染色。以Mankin评分为标准，增加Masson染色的结果评分，对OA的病程进行分期。(2)取软骨和滑膜标本，软骨标本来自股骨内侧髁。各个时间点的标本经处理后，液氮保存，酶联免疫吸附法(ELISA)检测Sox9、II型胶原、MMP一1、-3、一13的蛋白含量，实时荧光定量PCR(RealtimePCR)检测Sox9、II型胶原、MMP一1、-3、一13基因表达的变化，分析OA基质金属蛋白酶的变化特点及降钙素干预对骨关节

4、炎软骨的保护作用。(3)取各期胫骨内侧平台标本，研磨后提取RNA，实时荧光定量PCR(RealtimePCR)检测RANK和组织蛋白酶K(CK)表达量的变化，分析降钙素对OA早期软骨下骨骨吸收的影响。同时通过HE染色切片计数软骨下骨骨小梁的体积、数目、分离度，比较OA造模后2w和12w时骨小梁的差异。中文摘要降钙素对大鼠膝OA模型软骨退变和软骨下骨破骨吸收的影响结果(1)大体及组织观察对照组：造模2w关节软骨失去光泽，色暗，HE染色软骨细胞数量轻度增生；4w见软骨破坏，细胞数量增多，Masson染色红染，少许蓝色出现；6w软骨溃疡破坏明显，骨赘增生，细胞排列紊乱，Ma

5、sson染色红蓝相间；8w软骨缺损，骨赘增生明显，有软骨细胞坏死；12w可见软骨下骨外露，细胞数量明显减少。CT组：病理改变时期延后2w。Sham组大体和组织切片接近正常。(2)ELISA钡IJ定和RealtimePCR对照组和sham组比较：软骨MMP—l：显著上调(P

6、x9的表达上调，变化有差异(P

7、小梁分离度小于sham组(PO．05)。Sham和Sham+CT组没有差异(P>O．05)。结论：1．改良：Hulth法制作大NOA模型，即横断前交叉韧带及内侧半月板，是一种较为实用有效的膝关节OA模型制作方法。Mankin评分能基本反映OA的早、中、晚分期，iasson染色可以作为Mankin评分的补充。Ⅱ降钙素对大鼠膝OA模型软骨退变和软骨下骨破骨吸收的影响中文摘要2．引发软骨细胞外基质降解的MMPs分