苹果园土壤微生物多样性及酵母菌新种研究

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1、山东农业大学博士学位论文苹果园土壤微生物多样性及酵母菌新种研究姓名：陈汝申请学位级别：博士专业：果树学指导教师：姜远茂20120612山东农业大学博士学位论文摘要本文通过盆栽试验，采用微生物稀释平板培养法对平邑甜茶、八棱海棠、楸子、新疆野节果、东北山荆子5种苹果砧木土壤根际微生物数量、土壤酶活性及其相关性进行研究：以2年生红富士／平邑甜茶为试材，研究生草和覆盖对苹果根际土壤养分及微生物数量和群落代谢功能的影响；通过采集12个省(市)的81个苹果园土壤样品，采用微生物培养法研究了我国苹果主产区果园土壤微生物特征：利用26SrRNA的D1／D2区域序列分析并结合形态学特征对红富士苹果园的酵母茵

2、多样性进行了研究，并基于形态、生理生化特征以及18SrRNA、ITS和26SrRNA基因DI／D2区基因序列对子囊菌酵母新种和担子菌酵母新种进行鉴定。主要结果如下：1．不同苹果砧木土壤根际微生物各生理类群数量差异显著，并且都以细菌占绝对优势，放线菌次之，真菌最少。不同苹果砧木土壤根际蔗糖酶、磷酸酶、脲酶和过氧化氢酶活性各异。皮尔逊相关分析表明，土壤微生物数量与土壤酶活性之间存在相关关系。节果砧木根际土壤微生物多样性指数依次为新疆野苹果>平邑甜茶>八棱海棠>楸子>东北山荆子。2．与传统清耕栽培相比，生草和覆盖处理均能显著提高幼龄苹果根际土壤养分含量：各处理幼龄苹果根际土壤微生物以细菌占优势、

3、放线菌次之、真菌最少，生草和覆盖处理的根际土壤细菌、真菌、放线菌、自生固氮菌、纤维素降解菌和微生物总数量均显著高于清耕。土壤微生物数量与土壤养分含量之间存在显著相关性。生草和覆盖均显著增强土壤微生物利用碳源的能力，提高土壤微生物群落的功能多样性，效果依次为白三叶草>黑麦草>秸秆覆盖>清耕。3．土壤微生物各生理类群在我国苹果主产区果园中的优势不同，细菌在各苹果园土壤微生物中的比例均最高。Pearson相关分析表明，土壤微生物多样性指数与土壤有机质含量显著正相关。不同省区苹果园土壤微生物多样性指数存在差异．依次为：黑龙江>云南>新疆>山东>北京>宁夏>山西>辽宁>河北>河南>甘肃>陕西。对各地

4、苹果园土壤微生物数量进行聚类分析可将各省苹果园分为三类：黑龙江、辽宁；新疆、云南、陕西、甘肃、山西、宁夏：河北、山东、北京、河南，与我国根据气候和生态适宜标准划分的苹果主产区状况基本吻合。4．红富士果园中富含丰富的酵母资源，北京和山东两果园的酵母菌种构成明显差异，并分别具有不同的优势属。北京苹果园共分离酵母菌129株，鉴定为13属21种，优苹果园土壤微生物多样性及酵母菌新种研究势属为Pichia(4个种)，Cryptococcus(3个种)，Pseudozyma(3个种)，子囊菌占较大优势，分布于8属12种，占总种数的57．1％。山东苹果园共分离酵母291株，鉴定为13属26种，优势属为C

5、andida(6个种)，Pichia(4个种)和Cryptococcus(3个种)，并且子囊菌占较大优势，分布于7属17种，占总种数的65．4％。5．从泰安苹果园的土壤中分离到三株子囊菌酵-SJ：(TAllTR-1T，TAllTR-4和TAl1TR．6)，根据表型特征及18SrRNA，ITS和26SrRNA基因D1／D2区基因序列分析表明，属于Kazachstania属。命名为Kazachstaniataianensissp．nov．(模式菌株TAllTR—lT=AS2．4160T=CBS11405T)。通过18S及D1／D2序列N．J比对得，Ktaianensissp．nov．与Kaza

6、chstaniasinensis，Kazachstanianaganishii和Kazachstaniatelluris在同一个分支上。ITS．5．8SrDNA区总长度为983bp，长于已分离到的其它子囊菌酵母。6．从泰安苹果园中分离到4株担子菌酵母(Y13．11，Y2．1，Y6-3和Y8．2)，基于ITS和26SrRNA基因D1／D2区基因序列进行系统聚类分析，在系统树上这四个菌株聚类在Tremellomycetes的Kwoniella分支上，明显区别于它们的最近缘种。与Cryptococcuscuniculi最接近，但远离于Kwoniellaheveanens捃。因此定为新种，命名为K

7、woniellashandongens括sp．nov．(模式菌株Y13．1T=CGMCC2．04458T=CBS12478T)。MycoBank编号为MB564868。关键词：苹果园：土壤微生物多样性；酵母菌；新种．Ⅱ山东农业大学博士学位论文StudyonsoilmicrobialdiversityandnewspeciesofyeastsinappleorchardsAbstractUsingmicrobialdilu