牛磺鹅去氧胆酸抗小鼠肺纤维化作用的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文牛磺鹅去氧胆酸抗小鼠肺纤维化作用的研究姓名：周川申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：刘建柱20120614山东农业大学硕士学位论文中文摘要肺纤维化是最常见的肺间质疾病，也是呼吸系统最严重的疾病之一。它是一种以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱并最终导致肺间质纤维化为特征的疾病。迄今临床治愈仍是一难题，尚无一种令人满意的治疗方法。牛磺鹅去氧胆酸(Taurochcnodeoxycholicacid，TCDCA)是存在于动物胆汁中的一种无臭、白色粉末、味极苦的结合型胆汁酸。关于胆

2、汁酸及其有效成分的研究近些年引起了广泛关注，至从1999年和2003年分别发现了胆汁酸的两个受体FXRa(Makishimaetal，1999)和TGR5(Kawamataetal，2003)之后，胆汁酸已被视为信号分子或激素(HylemonPBetal，2009)，在机体内分泌调节(KatsumaSetal，2005；KeitelV，2008)、能量代谢(WatanabeMet耐，2006)、促进肝脏再生(HuangWetal，2006)及抗纤维化等方面发挥着重要作用。于2005年和2007年又

3、相继证实FXRa激动剂GW4064和胆酸能够降促进肝脏纤维溶解发生纤维化逆转(FiorueeiSelal，2005)并且能对肾脏起到保护作用(JiangTeta／，2007)。目前研究证实在人的肺脏同时存在FXRa和TGR5两种胆汁酸受体的表达(KawamataYetal，2003：AndreaB甜a／，2005)。是否同样具有抗肺脏纤维化作用尚无报道。本研究经检测发现小鼠肺脏也同时表达FXRa和TGR5两种受体，所以在此以小鼠作为研究对象制备肺纤维化模型，开展了TCDCA抗小鼠肺纤维化作用的研究

4、，希望为今后将TCDCA开发成为抗肺纤维化药物提供依据。本文采用博来霉素制备了小鼠肺纤维化模型(M．Gharaea-Kermaaieta／，2005；M．Gharaee．Kermanietal，2011)，开展了TCDCA抗肺纤维化作用的研究。在实验中将其随机分成5组，每组16只，分别为正常组、肺纤维化模型组和高、中、低三个剂量的TCDCA给药组，给药剂量分别为0．059／kg、0．1&g、0．2mg／kg。造模成功后进行灌胃给药，每日1次，持续三周，模型组和空白组灌服生理盐水。实验检测了小鼠肺脏

5、胆汁酸受体FXRa和TGR5表达，以及TCDCA分别对肺纤维化小鼠体重、剖解、肺系数、病理组织学和TNF．a、MMP-2、MMP．9和TIMP．2表达的影响。首先试验检测了胆汁酸受体FXRa和TGR5在大鼠、小鼠、豚鼠各器官中的表达情况。结果显示TGR5在大鼠、小鼠、豚鼠各器官中均有稳定的大量表达，而FXR只在小鼠肺脏中含量较多，在大鼠中表达量极少在豚鼠肺中表达也不稳定。小鼠按实验设计处理，发现中剂量可以明显增加小鼠体重。剖检后模型组和高剂量组肺叶病变严牛磺鹅去氧胆酸抗小鼠肺纤维化作用的研究重，有

6、灰白色纤维素性渗出物覆盖。肺表面及切面上可见多数散在性实变病灶，且有脓性分泌物。中剂量，和低剂量组虽有部分病变，但较正常组变化不明显。较模型组有较大改善。肺系数的结果显示模型组和高剂量组肺系数显著升高，中剂量和低剂量组得到改善，由此进一步证明了肺脏的剖检变化的情况。试验又通过由对肺组织的HE和Masson染色，对病理切片进行了进一步观察。可看出可以看出模型组和高剂量组肺泡内充满大量炎性渗出物，肺泡实变。肺泡腔充有大量增生毛细血管和成纤维细胞，正常肺组织结构消失。高剂量组在部分肺泡腔实变过程中伴随有

7、周边肺泡腔代偿性肺气肿。而中剂量组和低剂量组虽有少量炎性渗出物，但较模型组明显减轻。肺组织结构及轮廓犹在并未丧失其功能。试验还通过荧光定量PCR技术对肺脏内MMP一2、MMP．9、TIMP．2、和TNF．a五个指标进行了分析。发现模型组和正常组相比较，TNF．Q和TIMP．2表达均极显著增加，MMP．2和MMP．9极显著降低；低、中、高三个给药组与模型组相比较，均使模型小鼠n师．Q和TIMP-2极显著下降；低、中两个给药组与模型组相比较，均使模型小鼠MMP．9极显著增加：而三个给药组对MMP-2均

8、无显著影响。以上说明，TCDCA对小鼠肺纤维化具有改善作用。关键字：牛磺鹅去氧胆酸；肺纤维化；小鼠；博来霉素山东农业大学硕士学位论文Theeffectsoftaurochenodeoxycholicacidinpreventing’mo■●opulmonarVtlbrosisinmlCeAbstractPulmonaryfibrosisisthemostcommondiagnosisamongpatientspresentingwithinterstitiallungdisease