牛磺鹅去氧胆酸对小鼠免疫器官居及raw264.7细胞系的增殖和凋亡作用研究

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1、山东农业大学硕士学位论文牛磺鹅去氧胆酸对小鼠免疫器官居及RAW264.7细胞系的增殖和凋亡作用研究姓名：张文申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：石有斐；成子强20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要胆汁酸及其受体研究是目前国内外研究的热点领域。目前发现胆汁酸通过作用其受体FXRa和TGR5发挥调节机体内分泌、免疫功能及能量代谢等多种药理作用。牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)是胆汁酸的一种重要有效成分，以往研究发现其具有调节小鼠机体免疫功能的作用，本研究为了进一步揭示其免疫调节机理，开展了TCDCA对小鼠免疫器官及巨噬细胞系RAW264．7促增殖和抗凋亡作用的研究。本论文主要

2、研究内容及结果如下：在体内实验中，将小鼠随机分为4组，即正常组，正常给药组，地塞米松(DEX)诱导模型组，模型给药组，其中TCDCA的给药剂量设为O．19／kg。采用HE染色检测免疫器官的病理组织变化，EDU标记法检测免疫器官细胞增殖反应，TUNEL法检测免疫器官的细胞凋亡。病理图片显示给药组比模型组病理变化明显减轻，并趋于正常组。EDU结果表明正常给药组与正常组相比较，细胞增殖指数极显著的增加，即TCDCA对小鼠：{胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结的细胞增殖均具有极显著的促增殖作用；而模型给药组与模型组相比较，细胞增殖指数显著的增加，即TCDCA对模型小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋．、巴结的细胞增

3、殖均具有显著的促增殖作用。TUNEL结果表明给药组与模型组相比较，凋亡指数显著降低，即TCDCA对小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结的细胞凋亡均具有极显著的抗凋亡作用。在小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7上，采用CCK-8试剂盒检测了TCDCA对RAW264．7增殖反应，以及与LPS共刺激的RAW264．7细胞的增殖反应。结果表明无论TCDCA单独还是与LPS协同刺激均能显著地促进RAW264．7细胞的增殖。荧光定量方法检测了TCDCA对周期蛋白基因的mRNA表达的影响，表明不同剂量的TCDCA，对周期蛋白CyclinDl、CyclinEl、CyelinAl、CDK2mRNA的表达具有不同程

4、度的促进作用。采用二苯胺方法检测了TCDCA对DEX诱导的RAW264．7细胞凋亡的影响，结果表明与模型对照组相比TCDCA能够降低DEX诱导的小鼠单核巨噬细胞DNA片段化的百分率，即抑制DEX诱导的小鼠RAW264．7细胞凋亡，但具有剂量依赖性。荧光定量检测TCDCA对凋亡抑制蛋白基因mRNA表达的影响表明，TCDCA能不同程度的提高凋亡抑制蛋白CLAP．1、CIAP-2、XLAPmRNA的表达。综上本课题可得出如下结论：TCDCA对小鼠免疫器官及巨噬细胞系RAW264．7细胞具有促增殖和抗凋亡作用。同时TCDCA能上调周期蛋白基因及凋亡抑制蛋白基因牛磺鹅去氧胆酸对小鼠免疫器官及RA

5、W264．7细胞系的增殖和凋亡作用研究mRNA的表达。关键词：牛磺鹅去氧胆酸；RAW264．7；免疫器官；细胞增殖；细胞凋亡Ⅱ山东农业大学硕士学位论文StudyonEffectofProliferationandApoptoticInImmuneOrgansandRAW264．7CellLinesbyTCDCAinMiceAbstractTheresearchesaboutbileacidandreceptorhavebecomeahotspotatdomesticandforeignatpresent．Inrecentstudyavarietypharmacologicaleffec

6、tsofTCDCAthroughreceptorsofTGR5andFXRawerefound，such嬲regulatingendocrine，imnlunefunctionandabilityofmetabolicandSOon．TCDCAisanimportantactiveingredientofbileacid，01．11"previousstudieshaveshownthatTCDCAhaveaeffectofregulatingimmunefunctioninmice．Inordertofurtherrevealmechanismofimmunoregulationof

7、TCDCAinmice，wecarriedouttheresearchofproliferationandapoptoticinimmuneorgansofmiceandRAW264．7cellsbyTCDCA．mmainresearchcontentsandresultsare髂follows：Invivoexperiments，themicesweredividedrandomlyintofourgroups：controlgroup，no