清润方对糖尿病的治疗作用及其机制的实验研究

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1、中国中医科学院博士学位论文清润方对糖尿病的治疗作用及其机制的实验研究姓名：付莹坤申请学位级别：博士专业：中医内科学指导教师：林兰20120608清润方对糖尿病的治疗作用及其机制的实验研究中文摘要随着我国社会经济的发展，人民生活方式改变，体力活动减少以及肥胖的增加等因素导致糖尿病患病人数骤增。2010年《新英格兰医学杂志》发文指出中国20岁以上成人糖尿病的患病率高达9．7％，糖尿病前期的患病率达15．5％，已成为严重危害群众健康的公共健康问题。中医药一直在糖尿病的防治方面做着积极的努力，中国中医科

2、学院广安门医院林兰教授历经40余年临床与科研创立的糖尿病中医三型辨证理论(阴虚热盛、气阴两虚、阴阳两虚)，客观的反应了糖尿病中医证型的动态演变规律，有效地指导了糖尿病中医治疗的临床实践。清润方(由知母、黄柏、酒大黄等组成)专为糖尿病早期的阴虚热盛型而设，以滋阴清热法治疗糖尿病早期阴虚热盛患者临床疗效显著。本研究以清润方为研究对象，利用糖尿病模型大鼠观察了不同剂量清润方对糖尿病大鼠糖代谢的影响，并从脂代谢、肝脏炎症与氧化应激、骨骼肌糖代谢关键基因mRNA表达等方面探讨了其发挥作用可能的机制，以期为

3、清润方在糖尿病治疗中的临床应用提供理论依据与数据支撑。1．文献综述：本部分分别从糖尿病与胰岛素抵抗的关系、胰岛素抵抗相关机制(脂代谢紊乱、炎症与氧化应激、骨骼肌胰岛素抵抗)的研究现状、清润方组方原理与方中单味中药现代药理研究及中药治疗糖尿病研究进展等方面对本研究依托的研究基础进行了综述。2．实验研究：包括以下四个基础实验。2．1清润方对实验性糖尿病大鼠糖代谢及胰腺病理学形态的影响目的：观察清润方对糖尿病大鼠糖代谢及胰腺病理学形态的影响。方法：利用链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)

4、联合高糖高脂饲料的方法建立糖尿病大鼠模型。将实验动物分为空白对照组、模型组、清润方小、中、大剂量组(O．5，1，2g·k91·dJ)、二甲双胍组(150rag·kgJ·d。1)，各治疗组分别灌胃给予相应药物治疗。干预治疗4周后检测各组大鼠体重、空腹血糖(FBG)、血清胰岛素水平、口服糖耐量曲线下面积(AUC)，计算胰岛素敏感指数(ISI)与胰岛素抵抗指数(IRI)，光镜、电镜下观察胰腺病理形态学改变。结果：清涧方中、大剂量组和二甲双胍组较模型组FBG降低(P<0．05)；清润方各剂量组和二甲中国

5、中医科学院2009级博士研究生学位论文双胍组AUC均有不同程度的降低(P<0．05)；清润方中、小剂量组和二甲双胍组较模型组ISI升高，胰岛素抵抗指数IRI降低(P<0．05)；清润方中、d,齐JJ量组和二甲双胍组肝糖原含量升高(P<0．05)；光镜下显示清润方中、大剂量组及二甲双胍组胰岛数目的减少有所好转，虽大部分胰岛体积明显缩小，仍可见较大的胰岛；电镜下清润方各剂量组及二甲双胍组胰岛t3细胞内分泌颗粒较模型组增多。结论：清润方有降低糖尿病大鼠血糖的作用，其机制与改善糖尿病大鼠的胰岛素抵抗，保

6、护胰岛功能，促进糖尿病大鼠对葡萄糖的利用及肝糖原的合成有关。2．2清润方对实验性糖尿病大鼠脂代谢及肝脏病理学形态的影响目的：观察清润方对糖尿病大鼠脂代谢及肝脏病理形态学的影响，探讨其在脂代谢方面改善胰岛素抵抗的作用。方法：各组大鼠药物干预4周后取大鼠血清及肝脏组织，全血自动生化分析仪COD—PAP法测定总胆固醇(TCH0)，GPO-PAP法测定三酰甘油(TG)，清除法测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)；铜显色法测定血清游离脂肪酸水平；光镜下观察肝脏病理形态学改

7、变。结果：与模型组比较，清润方中、大剂量组糖尿病大鼠的TCHO、LDL．C水平降低(P<0．05)，清润方各剂量组和二甲双胍组糖尿病大鼠的HDL．C水平升高(P<0．05)，TG水平有降低趋势但无统计学差异；清润方中、d,齐tJ量组和二甲双胍组大鼠血清游离脂肪酸水平降低(P<0．05)；光镜下显示清润方中、大剂量组和二甲双胍组对肝脏的脂肪沉积有改善作用。结论：清润方有改善糖尿病大鼠脂代谢紊乱，抑制脂肪在肝脏沉积的作用。清润方对糖尿病大鼠“脂毒性”的改善是其发挥抗糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制之一。2

8、．3清润方对实验性糖尿病大鼠肝脏炎症及氧化应激的影响目的：观察清润方对糖尿病大鼠肝脏炎症反应及氧化应激的影响，探讨其对肝脏胰岛素抵抗的作用机制。方法：各组大鼠药物干预4周后取大鼠肝脏组织，酶联免疫吸附法(ELISA)法测定肝脏组织肿瘤坏死因子a(TNF．Q)及白细胞介素6(IL．6)含量；比色法测定肝脏组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SoD)活性。结果：与模型组比较，清润方各剂量组肝组织TNF—Q水平降低(P<0．05)，清润方小、大剂量组肝组织IL一6水平降低(P<0．05)，清润方