柑橘阶段性发育相关基因flc的功能分析

《柑橘阶段性发育相关基因flc的功能分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中农业大学硕士学位论文柑橘阶段性发育相关基因FLC的功能分析姓名：韩艳申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：胡春根201206柑橘阶段性发育相关基因FLC的功能分析捅要柑橘是我国重要的经济作物，但由于童期长达6-8年以上，严重制约了其育种进程和重要经济性状，如果实品质和成熟期等遗传机制的研究。前人研究表明，柑橘花芽分化需要冬季低温条件。FLC是低温春化调控成花的核心基因。本实验室前期已从枳中克隆了FLC的同源基因PtFLC。PtFLC拥有5个剪切本，分别在早实枳的不同发育阶段表达。为研究PtFLC在枳阶段发育中的作用，本研究采用RNAi技术，对枳进行遗传转化，抑制PtFLC基因的表达

2、，分析RNAi植株相关基因的表达动态。主要结果如下：1．RNAi载体的构建及枳的遗传转化经序列比对发现，PtFLC的5个剪切本5’端的第一个外显子比较保守，其中209bp的保守片段确定为本研究采用的干涉目的片段。通过在目的片段两端添加重组位点，利用Gateway技术将目的片段一步克隆到位，成功构建了双元干涉载体PHG-FLC。此载体能够编码ihpRNA结构，具有较高的干涉效率。利用农杆菌介导的转化，将干涉载体导入枳上胚轴，并进行再生，通过抗性筛选，最终获得了6个株系的阳性苗。2．RNAi植株PtFLC表达分析通过对6个转基因株系进行实时定量分析，转基因株系L19、L84、L85、L88和

3、L90中PtFLC的表达量与对照植株相比，均有不同程度降低，其中L84和L90的表达量最低，只有对照的0．2倍，表明这两个株系对PtFLC的RNA干涉是成功的。3．RNAi植株表型分析和PtSOCl、PtFT的表达分析目前转基因苗还处于幼苗阶段，其表型观察尚未发现与对照在形态上的不同。对PtSOCl和PtFT的表达水平定量分析结果表明，RNAi植株中PtSOCl和PtFT的表达量升高，且其表达水平变化与PtFLC呈负相关，证明了PtFLC对下游基因的表达发生了影响，也表明干涉是成功的，更多的表型有待进一步观察。关键词：枳；成花转变；遗传转化；PtFLC；RNAi。华中农业大学2012届硕

4、士研究生学位论文ABSTRACTCitrusisanimportanteconomiccrop．Thelongjuvenileperiod，usally6-8yearsincitrus，hasseverelyobstacledthebreedingprogressandgeneticstudyoneconomicallyimportanttraits．suchasfi-uitqualityandmaturity．PreviousstudiesindicatedthattrifoliateorangehastoexperiencelOWtemperaturepriortoflowerfor

5、mation．也US咒Cgenemightbeinvolvedduetoitswellknownkeyimportantroleinvernalizationpathway．入FLChomolog、namedPtFLChasbeenclonedfromPoncirustrifoliatainour、aboratory．FurtherexperimentrevealedthatPtFLCshowedalternativesplicingintofivetranscriptsselectivelyexpressedindistinctdevelopmentalstages．Inorderto

6、uncoverthefunctionof尸矿ZC'weconstructedtheRNAivector．andthelltransformeditintowildtrifoliateorangetocreateamaterialofdown．regulatedexpressionofPtFLc．Themainresultsareasfollows：1．RNAivectorConsti'uctionandtransf01111ationofPoncirustrifoliataSequencealignmentindicatedthatthefu-stexonin5’endofPtFLCwa

7、sconservedamongfivetranscripts．Thus，a209bpfragmentofthispartwaschosenfortargetinterference．Recombinationsiteswereaddedtotheendsofthetargetfragment，andthenthefragmentwasclonedintotheinterferencevectorpriGRVusingGatewayt