接骨药丸抑制脾多能干细胞源性破骨细胞样细胞骨吸收作用的实验与临床研究

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1、福建中医药大学硕士学位论文接骨药丸抑制脾多能干细胞源性破骨细胞样细胞骨吸收作用的实验与临床研究姓名：孟朋申请学位级别：硕士专业：中医骨伤科学指导教师：黄相杰201206研究生：孟朋导师：黄相杰教授中文摘要第一部分：接骨药丸抑制脾多能干细胞源性破骨细胞样细胞骨吸收作用的实验研究目的：通过建立体外破骨细胞培养体系，探讨接骨药丸抑制破骨细胞成熟分化及其骨吸收功能的效果。方法：选取Wistar大鼠20只并随机分为4组，实验组分别给予接骨药丸药液、骨碎补总黄酮药液，而对照组给服阿仑膦酸钠溶液，空白对照组则给予蒸馏水灌胃，每组均

2、每天灌胃一次，持续14天后心脏取血，高速离心获得含药血清冷藏备用。无菌条件下取胎鼠的脾脏，仔细研磨过滤，并在室温下离心5min，弃去上清液，用a一娅M培养液制备成脾多能干细胞悬液并培养72小时。消化并获得附壁细胞，再次高速离心并弃去上清液，用内含sM_CSF和RANKL的培养液定容并制备出浓度为5×105／m1的细胞悬液。取6孔培养板8块并分为4组，每组的培养孔中均分别提前放入了载玻片或骨片，并加入0．2ml细胞悬液，然后在加入相对应的含药血清后进行培养，每日在倒置显微镜下观看细胞生长情况。在培养10天后，将载玻片取

3、出进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色后计数染色(十)的细胞数目，将骨片取出经过固定、清洗后用1％甲苯胺蓝进行染色以显示骨吸收陷窝并在光镜下进行计数。结果均用均数±标准差(x±S)表示，通过SPSSl7．0软件运用t检验进行统计学分析。结果：每组培养孔中的细胞生长状况良好，在7-9天时多核不规则细胞占据了大部分视野，且经过TRAP染色后这些细胞表现出红染等破骨细胞的特点，骨片上也出现了数目不等的蓝染区域。接骨药丸组(A组)及骨碎补总黄酮组(B组)的两组计数较之空白对照组(D组)均明显减少并具有统计学意义(分别为P<0．01及P

4、<0．05)，但是B组与A组比较显示又明显逊色，t检验结果P

5、细胞的活性及其骨吸收的功能方面也表现出良好的效果，当然，这种效果较之阿仑膦酸钠这类临床最常用于抗骨质疏松的药物尚略显不著。关键字：脾多能干细胞，破骨细胞，骨吸收，中药第二部分：接骨药丸治疗原发性骨质疏松症的临床研究目的：研究本院自制方剂接骨药丸治疗原发性骨质疏松症的临床疗效，探讨接骨药丸对原发性骨质疏松症临床治疗的可行性和有效性，为该病的临床用药提供理论和实践依据。方法：收集2010年3月-2011年1月在山东省文登整骨医院确诊符合原发性骨质疏松症的患者76例。采用随机数字的方法将患者随机分为治疗组和对照组各38例。

6、两组患者分别于9AM给予患者阿仑膦酸钠(固邦：10mg／片)一片和接骨药丸(69／袋)1袋。两组均连续用药三月后停药。期间密切观测肝肾功能等以保证用药安全。分别于治疗前后用骨密度仪检测股骨上段Wards三角骨密度变化，检测包括血清钙、磷、碱性磷酸酶及尿钙／尿肌酐比值等骨代谢指标。运用骨质疏松症疗效判定标准判别两组的治疗效果，并依据中医证候疗效评价标准获得中医症候改善状况。结果：治疗组35例、对照组34例进入结果分析。治疗组在改善各项中医症候方面表现出了与对照组具有明显差异的作用，而在骨代谢指标对比方面，两组在血钙、磷

7、及碱性磷酸酶水平均无明显变化，唯有尿钙／尿肌酐比值较治疗前均明显降低，骨密度值也较治疗前明显增加，但是组间对比显示，虽然两组未表现出明显差异，但对照组较治疗组的改善作用明显偏好。因此，最终在总有效率方面，治疗组的总有效率为62．6％，而对照组的有效率却为64．7％，两组疗效比较虽未表现出显著性差异，但却是对照组略胜了一筹。结论：运用中医基础理论指导接骨药丸治疗原发性骨质疏松症，从整体辨证论治，能够明显改善患者的不适症状，但在促进钙质沉积、提高骨密度方面等方面与阿仑膦酸钠对比，3～．j妾{骋蒯唰脾多能二F鲴抛测生破骨细

8、删鞫穗骨吸收f乍用镌《验与Il缶床研究———————————————————————二二=二二==二==．：：：：：：：：：：：==：：：=：：：：：：：可能并不具有明显优势，合理的将接骨药丸与阿仑膦酸钠等西药配合使用，或可起到相得益彰的功效。关键字：原发性骨质疏松症，中医药，接骨药丸，阿仑膦酸钠4Postgraduate：PengMengTu