宫颈病变标本内hpv的分型检测及l1蛋白表达情况的调查

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1、分类号R71密级公开UDC硕士学位论文宫颈病变标本内HPV的分型检测及L1蛋白表达情况的调查学位申请人：杨晓菊学科专业：妇产科学指导教师：肖长义教授二○一二年六月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineSurveyontheexpressionofL1ProteinandthegenotypesofHumanpapillomavirusinthecervicallesionspecimensraduate

2、Student:YangXiaoJuMajor:GynaecologyandObstetricsSupervisor:Prof.XiaoChangyiChinaThreeGorgesUniversityYichang,443000,P.R.ChinaJun,2012三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人

3、完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学

4、硕士学位论文内容摘要目的：了解宫颈病变组织内HPVL1蛋白表达的情况，寻找HPVL1蛋白在不同病变组织内的表达规律，有无作为肿瘤治疗的靶侯选物的可能。同时研究HPVL1C-末端共同序列多肽抗体对组织内HPVL1蛋白的检测能力，能否今后疫苗研制及肿瘤治疗的靶向抗体提供理论及实验上的支持。方法：1）采用巢氏PCR技术对所有宫颈病变的石蜡标本进行HPV感染检测，确定HPV感染检出率；2）采用HPV基因杂交分型技术对HPVDNA阳性的标本，进行分型检测，确定HPV感染的型别；3）采用本课题组制备的HPVL1多肽抗体做为一抗，对所有标本进行免疫组织化

5、学检测，确定HPVL1蛋白表达情况；同时采用市面上已成熟的HPVL1蛋白抗体做为一抗对所有标本进行免疫组织化学检测，确定HPVL1蛋白表达情况；4）采用统计学软件进行分析，从而得出结论。结果：1）用HPVL1通用型引物MY09/11对70例标本所提取DNA进行PCR扩增，++检出30例HPVDNA阳性标本，HPV检出率为42.86%；用HPVL1通用型引物GP5/6对MY09/11扩增结果为阴性的所有标本进行PCR扩增，检出11例HPVDNA阳性标本，HPV检出率为27.50%；巢氏PCR共检测到41例HPVDNA阳性标本，HPV感染总检出

6、率为58.57%。2）HPV型别总检出率87.80%（36/41）。其中单一感染有26例，占72.22%；混合感染有10例，占27.78%。混合感染中，7例为二重感染，3例为三重感染。按检出频数由多到少的顺序，依次为HPV16、58、6、11、31、33、39、45、59和68。HPV16和58检出率较高，HPV16检出率最高为55.10%。3）采用本课题组自己制备的HPVL1多肽抗体的免疫组织化学方法检出43例为阳性反应，总检出率为61.43%；采用HPVL1蛋白抗体的免疫组织化学方法检出48例为阳性反应，总检出率为68.57%。发现不同

7、宫颈病变的组织内均有HPVL1蛋白表达，只是表达率有所不同，检测癌变组织L1表达，其目的是确定HPVL1蛋白有作为肿瘤治疗的靶侯选物的价值。4）用2两种不同抗体的免疫组织化学检测结果做配对四格表X检验，得到P=0.472＞0.005，差异无统计学意义，两种抗体对HPVL1蛋白的检出结果无明显差别，可认为相同，并且对HPVL1蛋白检测具有同样高的检出率。结论：1）宜昌市第一人民医院就诊妇女宫颈病变中HPV检出率为58.57%，其中HPV16及HPV58检出率较高，且以HPV16型最高（为55.10％）。2）在宫颈癌中，HPVL1蛋白有表达，其

8、有作为肿瘤治疗的靶侯选物的价值。3）本课题组的HPVL1多肽抗体制备成功，并且与已商品化的HPVL1蛋白抗体对HPVL1蛋白的检出具有一致性。HPVL1多肽抗体对HPV感染具有广