阿维a酸联合tnf-a对人皮肤鳞状细胞癌a431增殖和caspase-3表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文阿维A酸联合TNF--a对人皮肤鳞状细胞癌A431增殖和Caspase--3表达的影响姓名：宫模杰申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病学指导教师：丁政云201203中文摘要’阿维A酸联合TNF-Q对人皮肤鳞状细胞癌A431增殖和Caspase-3表达的影响摘要目的：皮肤鳞状细胞癌(squamouscellcarcinoma，SCC，简称鳞癌)是起源于表皮的一种恶性肿瘤，其发病率逐年上升。对常规治疗效果不佳，外科手术是首选的治疗方法，然而皮肤鳞癌转移后的治疗是期待解决的问题。因此，寻求有效的药物进行治疗具有重要意义。维

2、甲酸类(retinoids)属于维生素A的一类衍生物，包含多种同分异构体：13．顺式维甲酸，全反式维甲酸，9．顺式维甲酸等。以往研究证明维甲酸类化合物在细胞的增生、分化，皮肤炎症过程中发挥重要作用，对肿瘤细胞具有很强的诱导分化、抑制增殖的作用。肿瘤坏死因子(TumorNecrosisFactor，n师)由巨噬细胞产生及释放，同时，B淋巴细胞产生一种与TNF类似的淋巴毒素，其与TNF享有共同受体。为了区分，巨噬细胞产生的毒素称为TNF．伐，淋巴细胞产生的毒素称为TNF．B，通过与细胞膜表面的对应受体结合，激活细胞信号转导系统可引起肿瘤细胞的凋

3、亡，TNF．0【可使肿瘤局部产生凝血，肿瘤血源阻断引起局部缺血坏死，可抑制肿瘤细胞生长。本研究以人表皮鳞癌细胞株A431为研究对象，探讨阿维A酸TNF．仪在不同浓度、不同作用时间上对鳞状细胞癌的作用及形态分化的影响，探讨两药联合应用对人A431细胞表达Caspase．3的影响。方法：l细胞培养：在DMEM培养基中培养A43l细胞，置于饱和湿度、37℃、5％C02的培养箱内做常规传代培养。2用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测2．1TNF．c【对A431细胞增殖抑制率的影响设空白对照组、阴性对照组和实验组，实验组分为浓度为1U／L、2U／L-

4、、5帆的TNF一0【组分别于加药后培养12h、24h、48h进行测定。2．2测定阿维A、阿维A联合TNF．0【对A431细胞增殖抑制率的影响中文摘要■设空白对照组、阴性对照组和实验组，实验组又分为浓度各为10kmaol／L阿维A酸组，10岬01／L阿维A酸组与5U／LTNF．Q组联合用药组，分别于加药后培养24h、48h、72h进行测定。3倒置相差显微镜及HE染色法观察经过不同浓度药物及联合药物处理后细胞的分化及形态变化。4应用免疫细胞化学法测定对Caspase．3蛋白表达的影响。5流式细胞仪(FCM)检测不同浓度药物及联合药物处理的A43

5、1细胞Caspase．3蛋白表达状况。6运用统计软件SPSSl3．0对数据进行统计分析。结果：lMTT比色分析法检测显示1．1TNF．0【对人表皮鳞癌细胞A431增殖抑制的影响TNF．仅组与阴性对照组相比，TNF．Q在l肌至5U／L浓度范围内对具有明显的增殖抑制作用，呈现明显的剂量和时间效应关系。在12h、24h、48h时间段内，TNF．仪随着浓度的增加对A431细胞的抑制也出现加强，且以浓度为5U／L组作用在48h的抑制率为最高，抑制率相比差异(P

6、色法检测各组细胞的抑制率，根据试验结果，我们选择了10urnol／L阿维A进行后续试验。阿维A联合TNF．0【组：将实验分为3组，阴性对照组、10gmol／L阿维A组、10lamol／L阿维A联合5U／L耵师．OL组。上述各组药物作用细胞48h后，各实验组细胞的抑制率分别是12．35％，23．46％、47．56％，可见联合用药组对细胞的抑制率明显高于单独用药组，差别具有统计学意义(P

7、部分细胞呈漂浮状态，而对照组细胞贴壁能力无明显变化。随着对处理时间的加长及增加药物的浓度，细胞贴壁能力比之前明显下降。2．1．2细胞大小和形态的变化：处理24h后，实验组仅少部分细胞变小、变圆，而对照组未有明显变化。继续延长处理时间及加大药物的浓度，细中文摘要：、胞的分布出现分散，呈显著皱缩，甚至破裂，失去原有折光性，生长缓慢。2．2联合药物后细胞变化主要表现在两方面。2．2．1细胞贴壁能力的变化：处理24h后，实验组贴壁能力明显下降，部分细胞呈漂浮生长状态，而阴性对照组细胞贴壁能力未有明显变化，贴壁良好。2．2．2细胞大小和形态的变化：处

8、理24h后，实验组少数细胞变小、变圆，而阴性对照组细胞形态和大小未有明显变化。随着处理时间的增长，药物浓度的增加，细胞散在分布，呈显著皱缩，甚至破裂，失去原有折光性，生长缓慢。而