波形蛋白与dna拓扑异构酶ⅱ在病理性瘢痕中的表达

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1、河北医科大学硕士学位论文波形蛋白与DNA拓扑异构酶Ⅱ在病理性瘢痕中的表达姓名：高小青申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：曹翠丽201203中文摘要波形蛋白与DNA拓扑异构酶Ⅱ在病理性瘢痕中的表达摘要目的：皮肤烧、创伤后的过度修复常导致病理性瘢痕的形成，作为主要修复细胞之一的成纤维细胞，其异常增殖和过度分泌是瘢痕过度增生和持续存在的主要原因。DNA拓扑异构酶II通过调节DNA结构变化在生物体内发挥重要作用，TopoII又分为Q和13两种亚型，TopoIIQ主要存在于增殖的细胞中，参与细胞有丝分裂；TopolIB主要存在于增殖不典型的细胞，通过调节染

2、色质构型变化参与基因转录调控。二者在病理性瘢痕成纤维细胞中表达，目前尚未见报道。为此，本研究比较了波形蛋白及DNA拓扑异构酶IIa、p在病理性瘢痕、成熟瘢痕和正常皮肤中的表达情况，探讨TopoII与成纤维细胞生物学特征的关系及它们在瘢痕形成中的作用。方法：标本收集：收集邢台人民医院烧伤整形外科手术患者病理性瘢痕lO例，成熟瘢痕10例，同一患者多余的正常皮肤组织10例作为对照，分组实验。苏木精．伊红染色：标本固定，石蜡包埋，以59m厚连续切片，常规HE染色，封片。光镜下观察各组皮肤结构，照相。请病理科专家根据生物学特征和病理特征鉴定是否为正常皮肤、病理性瘢痕和成熟瘢

3、痕。免疫组织化学(SP法)染色：将标本经固定、脱水，石蜡包埋，5¨_rn连续切片，按常规方法作波形蛋白、拓扑异构酶IIa、p免疫组化。显微镜下观察，照相。检测波形蛋白、拓扑异构酶IIQ、p在各组的表达。以双盲法进行结果判别，波形蛋白阳性反应产物位于细胞浆，拓扑异构酶110【、p阳性反应产物定位于细胞核。每组切片取10个高倍视野，计算阳性反应物的平均光密度值，结果以均数士标准差表示。统计学分析数据分析用SPSS13．0统计软件处理，进行单因素方差分析，并进行两两比较。以P<0．05为差异有统计学意义。结果：HE染色：正常皮肤表皮较薄，真皮结构清晰，具有突向表皮的真皮

4、乳头，结缔组织纤维较细，成纤维细胞呈典型的“指纹状”生长，平行排列，极性明显。病理性瘢痕表皮角化严重，表皮中的基底层细胞明显增生，细胞层次增加。真皮层较厚，大量的胶原纤维增生，排列较正常皮肤结构粗大，表现为结节状或漩涡状不规则的胶原束，其中可见少许胶原纤中文摘要维呈片状的玻璃样变。胶原纤维束中弥漫分布较多的成纤维细胞及微血管。成纤维细胞胞核接近圆形或三角形，胞浆丰富，排列紊乱，极性消失，有明显的交叉重叠现象。成熟瘢痕表皮与正常皮肤相似，层次清晰。真皮分层不明显，真皮内胶原纤维明显多于正常皮肤，但是较病理性瘢痕纤细，分布较规则，细胞成分少。波形蛋白免疫组化结果：正常

5、皮肤内波形蛋白阳性细胞较少，主要分布于表皮基底层细胞基底部与真皮交界区，真皮乳头及真皮乳头层内可见散在阳性细胞，其他部位未见阳性细胞。病理性瘢痕表皮内波形蛋白阳性细胞少见，但是真皮乳头及真皮内广泛分布有波形蛋白阳性细胞，细胞体积较大，胞浆丰富，主要分布于小血管周围和真皮网织层旋涡状增生的瘤样增生的中心部位。成熟瘢痕内波形蛋白阳性细胞在表皮基底层及真皮内表达明显多于正常皮肤，但是较病理性瘢痕的染色浅，细胞体积小，且排列较规则。Topo110【免疫组化结果：在正常皮肤和成熟瘢痕表皮基底层可见TopoIIa阳性细胞，成熟瘢痕表皮基底层表达比正常皮肤稍强，真皮内未见阳性细

6、胞。病理性瘢痕表皮基底层细胞内TopoIIa表达明显降低，呈弱阳性。病理性瘢痕真皮乳头层小血管周围可见阳性表达。在网织层增生组织之间，部分血管周围呈现阳性表达。TopoIIp免疫组化结果：正常皮肤表皮基底细胞层、棘细胞层、颗粒细胞层均可见阳性细胞，基底层着色相对较深，真皮内未见阳性细胞。在成熟瘢痕表皮基底细胞层、棘细胞层和颗粒细胞层均有阳性细胞，数量较正常皮肤增多，真皮内未见阳性染色细胞。在病理性瘢痕表皮可见少量阳性表达细胞，棘细胞层和颗粒细胞层较基底层更明显。真皮乳头层未见阳性细胞，真皮网织层内结节状或旋涡状排列的胶原纤维间可见大量染色较深的阳性细胞，细胞大，形

7、态不规则。结论：波形蛋白是成纤维细胞特异性的标志，波形蛋白免疫组化结果显示在正常皮肤内仅有少量表达，而在成熟瘢痕和病理性瘢痕中大量表达，证实成纤维细胞参与创伤愈合及瘢痕形成过程。TopoII位与TopoIIp阳性细胞在病理性瘢痕不同部位的表达程度不同，提示不同部位的成纤维细胞处于不同生物学状态。Topoll0【在病理性中文摘要瘢痕真皮血管周围高表达，提示此部位成纤维细胞为增殖型，处于活跃增殖状态；而TopoIIp在真皮网织层胶原纤维大量增生部位高表达，提示此处的成纤维细胞为合成型，与TopoIIp参与转录调节有关。关键词：成纤维细胞；波形蛋白；拓扑异构酶IIc‘；

8、拓扑异构酶