地衣芽孢杆菌w10抗菌蛋白的发酵工艺与应用技术研究

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1、宋浩：地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的发酵工艺与应用技术研究地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的发酵工艺与应用技术研究摘要：地衣芽孢杆菌是一种生防细菌，其对灰葡萄孢(Botrytiscinema)等多种重要植物病原菌有较强的拮抗作用。该菌W10菌株拮抗植物病原真菌的原理之一是产生抗菌蛋白，这种蛋白显著破坏菌体细胞，抑制菌丝生长和产孢。本论文对W10菌株发酵产生抗菌蛋白的工艺条件和应用技术进行了研究。W10菌株发酵培养基优化试验结果表明，最佳发酵培养基配方为黄豆饼粉10．1319／L，蛋白胨1．126g／L，玉米淀粉16．8949／L，葡萄糖2．413g／L，硫酸铵7．9659／L，KH2P040．459／

2、L，MgS040．459／L，NaCl4．5g／L。W10菌株最佳发酵条件为：种子菌菌龄为12h；发酵时间为60h；接种量为2％；温度为0．20h300C，20．60h280C；pH为7．0；溶氧值为0．20h30％，20．60h20％；发酵方法为补料分批发酵，补料培养基配方为109／L葡萄糖、59／L蛋白胨，第一次补料在发酵第10h时；第二次补料在发酵第18h时，两次补料用量均为500mL；较适宜的消泡剂为泡敌，浓度200mg／L，用量为100mL。利用优化培养基，在最佳条件下发酵W10菌株，优化后的发酵液对灰葡萄孢的抑制作用为99．5％，优化前为73．9％，比优化前的抑制效果提高了34．6

3、％。不同用药方法对抗茵蛋白防效有明显影响。将抗菌蛋白与腐霉利、啶酰菌胺进行复配，测定对灰霉病菌的增效作用，结果表明，当腐霉利与抗菌蛋白按1：1和1：5进行复配有增效作用，共毒系数分别是230．4114与141．0645。而与啶酰菌胺复配没有增效作用。发病前施用抗菌蛋白的防效可达73．72％，发病初期施用的防效为66．38％，但病斑扩展后的防效仅有46．72％。提高抗菌蛋白浓度能增加防效，使用剂量为lmg／mL、2mg／mL、3mg／mL时，防治效果分别达73．57％、81．82％与86．79％。增加使用次数有利于控制病害，使用抗菌蛋白1次、2次与3次的防效分别为74．43％、83．49％与88

4、．41％。不同温度下使用抗菌蛋白，防效没有差异。进行抗茵蛋白防治番茄灰霉病试验，使用后10d调查，259／亩、509／亩的对叶片病害的防效分别为66．7％与68．3％，20d的防效仍可达60．61％与65．34％，防II扬州大学硕士学位论文效均高于化学药剂腐霉利259／亩的效果(45．3％)。用药前摘除所有病果，药后10天调查，使用抗菌蛋白与腐霉利的处理均未出现病果，清水对照病果率为5．6％。关键词：地衣芽孢杆菌，抗菌蛋白，发酵条件，防治效果，番茄灰霉病宋浩：地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的发酵工艺与应用技术研究IIIIIlllIlllMIIIIllIllUtUIY2258857Optimizat

5、ionofFermentationConditionsforBacilluslicheniformisWl0ProducingantifungalproteinandItsApplicationTechniquesAbstract：BacilluslicheniformisWl0isanantagonisticbacteriumthathassignificantinhibitioneffectonBotrytiscme旭aandotherimportantplantpathogens．BacilluslicheniformisWl0Canproduceantifungalprotein，wh

6、ichcanevidentlydamagethemycelialcell，andinhibitthepathogengrowthandsporulation．TheexperimentsofoptimizingthefermentationmediumandconditionsofthestrainWl0werecarriedout．Furthermore，thispaperstudiedtheapplicationtechniquesoftheantifungalprotein．Theresultsoftheexperimentsconcludedthattheoptimumfermenta

7、tionmediumofstrainWl0consistedof10．131g／Lsoybeanflour,1．126g／Lpeptone，16．894g／Lcornflour，2．413g／Lglucose，7．965g／Lammoniumsulfate，0．45g／LK2HP04，0．45g／LMgS04，and4．5g／LNaCl．Also，theoptimumfermentationcon