pge2对子宫内膜异位症患者黄素化颗粒细胞增殖与凋亡的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文PGE2对子宫内膜异位症患者黄素化颗粒细胞增殖与凋亡的影响姓名：申鑫鑫申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：黄向华201203中文摘要PGE2对子宫内膜异位症患者黄素化颗粒细胞增殖与凋亡的影响摘要子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)简称内异症，以子宫内膜组织异位到子宫腔以外的部位为特征，是育龄妇女的常见病，其发病率高达15％。临床上内异症与不育关系极为密切，内异症患者中约30％"--'50％合并不育，而20％'-'50％不育症妇女患有内异症。随着研究深入，学者发现内异症对生殖力的损害是多方面的，除了造成盆腔粘连及

2、输卵管梗阻等解剖学改变外，内异症患者生殖道局部微环境及内分泌异常，卵泡发育潜能降低、颗粒细胞凋亡增加、卵母细胞质量差也是导致其不育的重要原因。目前，国内外学者正在竭力探寻引起这些改变的理化因素，以期解答内异症妇女低生育力之谜。卵泡是女性生殖的基本单位，卵丘颗粒细胞与卵母细胞形成缝隙连接，进行细胞间信息传递和物质能量交换。卵丘颗粒细胞在卵母细胞发育和成熟过程中发挥着极其重要的调节作用，其状态可作为衡量卵母细胞质量、受精能力乃至胚胎发育潜能的一个重要参考指标。此外，颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的直接诱导因素，而内异症患者卵泡发育异常，卵泡期延长，卵泡生长速度明显

3、减缓，优势卵泡缩小，同时伴有较多空卵泡及闭锁卵泡出现，这可能与其颗粒细胞凋亡率显著增高密切相关。因此，对内异症患者卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡睛况开展研究显得十分必要。PGE2是具有多种生物活性的二十碳脂肪酸，广泛存在于人类、哺乳动物组织和体液中，与炎症、免疫、肿瘤等重要病生理过程有关。异位内膜高表达COX．2，使得内异症患者血清和腹腔液中PGE2浓度显著升高，而PGE2通过促进新生血管形成、抑制细胞凋亡、刺激雌激素合成等途径促进内异症发生发展。PGE2在卵巢局部可由颗粒细胞大量合成，通过旁分泌及自分泌方式而发挥作用。目前比较明确PGE2与卵子的成熟、排卵的发

4、生及黄体的维持有关，然而PGE2对人黄素化颗粒细胞增殖及凋亡的调节作用尚不十分清楚。因此，探讨作为内异症致病关键因子及生殖功能调控因子的PGE2对颗粒细胞增殖与凋亡的影响，是研究内异症不育患者中文摘要卵巢功能异常的一个极好的切入点。。基于上述，本研究第一部分自接受IⅥ．治疗的输卵管不育患者卵泡液中分离黄素化颗粒细胞，采用Real-timePCR、In．cellWestern及MTT法检测PGE2对颗粒细胞survivin、caspase．3mRNA和蛋白表达，以及细胞增殖率的影响，探讨PGE2对颗粒细胞增殖与凋亡的调控作用机制；第二部分则在前部分研究的基础

5、上，进一步了解内异症患者颗粒细胞survivin、caspase．3mRNA及蛋白表达的改变，并检i贝IJPGE2对内异症患者颗粒细胞survivin、caspase．3mRNA及蛋白表达的影响，以期探讨内异症患者颗粒细胞功能状态及凋亡增加原因，为阐明内异症患者低生育能力提供理论依据。第一部分PGE2对人黄素化颗粒细胞survivin、easpase．3表达的影响目的：检测PGE2对人黄素化颗粒细胞survivin、caspase．3表达的影响，探讨PGE2对颗粒细胞增殖与凋亡的调控机制。方法：收集因输卵管因素不育而接受IVF治疗患者卵巢黄素化颗粒细胞，预

6、培养48小时后分组，用50ng／mlPGE2分别处理人黄素化颗粒细胞Oh、6h、12h和24h；Ong／ml、10ng／ml、50ng／ml和250ng／mlPGE2处理人黄素化颗粒细胞的干预时间根据上述结果所得时间效应而定，采用Real-timePCR、In．cellWestem方法检测颗粒细胞survivin、caspase．3mRNA及蛋白表达的变化；采用MTT比色法检测不同浓度PGE2对颗粒细胞增殖率的影响。结果：以0h为对照组，50ng／mlPGE2干预人颗粒细胞12h以内，survivinmRNA及蛋白表达明显上调，同时caspase。3mRN

7、A及蛋白表达显著下调(Po．05)。以On∥ml为对照组，PGE2各浓度组干预颗粒细胞6h后，均可刺激颗粒细胞内survivinmRNA及蛋白表达，抑制caspase．3mRNA及蛋白表达，吸光度

8、值A492值增加，细胞增殖率上升，呈浓度依赖型；且以PGE2浓度超