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时间:2019-02-16
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1、河北医科大学硕士学位论文p38通路在液压冲击伤性脑水肿AQP4表达变化中作用姓名:韩仰军申请学位级别:硕士专业:外科学指导教师:孙国柱201203中文摘要p38通路在液压冲击伤性脑水肿AQP4表达变化中作用摘要第一部分:大鼠液压冲击伤性脑水肿p38MAPK表达规律及其与AQP4表达变化的关系目的:观察大鼠液压冲击伤性脑水)]中p38MAPK表达规律及其与AQP4表达变化的关系。方法:雄性SD大鼠56只,体重250---,3009,随机分为对照组(NC组)和外伤组(TBI组),其中TBI组又按伤后1h,6h,12h,24h,3d
2、,7d六个时间点分为6个亚组,每组8只。TBI组动物常规麻醉开颅,制作液压冲击伤动物模型;NC组只行颅骨开窗但不给予液压打击。NC组于术后,TBI组于术后相应时间点进行神经功能评分后,再均以10%水合氯醛过度麻醉,断头处死,开颅取脑,经损伤区切成3mm厚冠状脑片,HE染色行组织形学观察,免疫组织化学染色方法检测AQP4、p38MAPK和P.p38MAPK。从损伤区前缘取100mg左右脑组织应用干湿重法测脑组织含水量。损伤区后缘脑组织矢状分为2部分,其中一份用WesternBlot检测AQP4,p38MAPK和p-p38MAPK
3、含量。另一份用RT.PCR检测AQP4mRNA的表达。结果:l神经功能评分:TBI组与NC组比较,在伤后6h评分开始减低(2.875士1.126,P<0.05);12h(4.375士0.916)较6h有所升高,但仍低于NC组(P4、现空泡变性,并伴有胶质细胞的增生,3d时水肿程度有所减轻,7d时明显减退,但胶质细胞增生逐渐显著。3大鼠脑含水量TBI组与NC组相比,1h时差异无统计学意义(P>O.05),6h时稍升高(79.54士0.715,P<0.05),12h明显升高(81.89士0.581,P<0.05),24h达到高中文摘要峰(83.31+1.115,P<0.05),3d开始下降(82.13+0.593,P<0.05),7天明显下降(81.24+1.010,P<0.05)。4免疫组化AQP4主要在星形胶质细胞和室管膜细胞胞膜表达,尤其丰富表达于与毛5、细血管和软脑摸直接接触的星形胶质细胞足突上。TBI组动物水肿脑组织AQP4于伤后6h(0.424土0.021,P<0.05)开始增高,24h(0.909+0.052,P<0.05)达到高峰,随后逐渐降低。p38MAPK在神经元和神经胶质细胞都有表达,尤其在脑室两侧和脉络丛表达明显,在液压冲击脑损伤后随着时间延长其表达逐渐增强,12h(O.400士0.034,P<0.05),24h(O.585土0.026,P<0.05),3天(0.746士0.040,P<0.05),7天(0.917+0.040,P<0.05)。P.p38MAP6、K则主要表达于细胞核,在正常脑组织中几乎不表达,液压冲击脑损伤后其表达升高,且变化趋势与AQP4变化趋势相似,6.12h(0.292+0.022,0.499士0.019,P<0.05)逐渐升高,24h(0.911士0.049,P<0.05)达高峰,3天后出现下降(O.666土0.037,P<0.05)。5WesternBlot.TBI组与NC组相比,TBI组动物水肿脑组织AQV4蛋白表达从6h开始增高(1.639士0.161,P<0.05),12h(2.303士0.211,P<0.05),24h达到高峰(2.822士0.1507、,P<0.05),3d时降低(2.112士0.195,P<0.05),7d后明显降低(1.554士0.199),但仍高于正常(P8、3),12h(1.755+0.079,P<0.05),24h(2.082士0.106,P<0.05),3d(2.211士0.107,P<0.05),7d(2.373士0.064,P<0.05)6RT-PCRTBI组动物水肿脑组织AQP4mRNA的表达从1h(O.186士0.0
4、现空泡变性,并伴有胶质细胞的增生,3d时水肿程度有所减轻,7d时明显减退,但胶质细胞增生逐渐显著。3大鼠脑含水量TBI组与NC组相比,1h时差异无统计学意义(P>O.05),6h时稍升高(79.54士0.715,P<0.05),12h明显升高(81.89士0.581,P<0.05),24h达到高中文摘要峰(83.31+1.115,P<0.05),3d开始下降(82.13+0.593,P<0.05),7天明显下降(81.24+1.010,P<0.05)。4免疫组化AQP4主要在星形胶质细胞和室管膜细胞胞膜表达,尤其丰富表达于与毛
5、细血管和软脑摸直接接触的星形胶质细胞足突上。TBI组动物水肿脑组织AQP4于伤后6h(0.424土0.021,P<0.05)开始增高,24h(0.909+0.052,P<0.05)达到高峰,随后逐渐降低。p38MAPK在神经元和神经胶质细胞都有表达,尤其在脑室两侧和脉络丛表达明显,在液压冲击脑损伤后随着时间延长其表达逐渐增强,12h(O.400士0.034,P<0.05),24h(O.585土0.026,P<0.05),3天(0.746士0.040,P<0.05),7天(0.917+0.040,P<0.05)。P.p38MAP
6、K则主要表达于细胞核,在正常脑组织中几乎不表达,液压冲击脑损伤后其表达升高,且变化趋势与AQP4变化趋势相似,6.12h(0.292+0.022,0.499士0.019,P<0.05)逐渐升高,24h(0.911士0.049,P<0.05)达高峰,3天后出现下降(O.666土0.037,P<0.05)。5WesternBlot.TBI组与NC组相比,TBI组动物水肿脑组织AQV4蛋白表达从6h开始增高(1.639士0.161,P<0.05),12h(2.303士0.211,P<0.05),24h达到高峰(2.822士0.150
7、,P<0.05),3d时降低(2.112士0.195,P<0.05),7d后明显降低(1.554士0.199),但仍高于正常(P8、3),12h(1.755+0.079,P<0.05),24h(2.082士0.106,P<0.05),3d(2.211士0.107,P<0.05),7d(2.373士0.064,P<0.05)6RT-PCRTBI组动物水肿脑组织AQP4mRNA的表达从1h(O.186士0.0
8、3),12h(1.755+0.079,P<0.05),24h(2.082士0.106,P<0.05),3d(2.211士0.107,P<0.05),7d(2.373士0.064,P<0.05)6RT-PCRTBI组动物水肿脑组织AQP4mRNA的表达从1h(O.186士0.0
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